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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于E.coli分泌的重组蛋白提取
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shxteacher

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 关于E.coli分泌的重组蛋白提取 已有1人参与

通过pelB信号肽（或其它信号肽）将目的蛋白分泌至E.coli的周质空间，第一次做大肠杆菌分泌外源蛋白，问题来了，
现在我搞不清：如果我要收集目的蛋白，
<1>是离心取培养液清液（目的蛋白分泌至培养液中）？
<2>离心收集细胞，破碎细胞，收集蛋白（目的蛋白在周质空间，无法进入培养液，需要破碎细胞收集）？

哪位大侠做过大肠杆菌分泌表达系统，请不吝赐教啊？
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OMG
1楼 2015-01-04 09:42:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shxteacher: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-01-04 20:12:55
shxteacher(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-04 21:18:03
两种方法都不对，第二种方法虽然可以获得目的蛋白，但是把胞内蛋白也收集了，跟胞内表达没区别啦。
正确的方法分子克隆和文献上有，叫渗透压休克法，收集细胞后重悬于蔗糖溶液，冰浴后加低渗溶液，离心收集上清。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-01-04 20:07:12
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流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫
楼主有没有解决这个问题
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3楼2017-02-10 21:48:57
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SherryChen32

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-01-04 20:07:12
两种方法都不对，第二种方法虽然可以获得目的蛋白，但是把胞内蛋白也收集了，跟胞内表达没区别啦。
正确的方法分子克隆和文献上有，叫渗透压休克法，收集细胞后重悬于蔗糖溶液，冰浴后加低渗溶液，离心收集上清。
...

请问有没有相关文献

发自小木虫IOS客户端
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心如止水，霸气十足
4楼2018-02-28 10:13:09
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