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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DNS法测定碱性纤维素酶的酶活
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long_haihu

金虫 (著名写手)

[求助] DNS法测定碱性纤维素酶的酶活 已有1人参与

各位大侠：
      用DNS法测定碱性纤维素酶的酶活力，理论上讲，应该是底物CMC、显色剂DNS都过量。换言之，当酶量一定时，随着CMC和DNS的增加，酶活力先增加后不变的趋势。

我现在测定酶活时，碰到这样一个情况：当酶液加入量一定，可能在CMC和DNS都不足量时，固定DNS的加入量，增加CMC的加入量，酶活力随着CMC的增加呈先增加后减小的趋势。给人的感觉是当DNS不足时，过量的CMC会阻止葡萄糖和DNS显色。

各位，CMC、DNS、酶量这三者的关系，是怎样影响纤维素酶酶活的测定结果的？有没有专业文献介绍这方面的机理的？中英文文献都可以。

因为我不是学习生物的，比较白痴，期待和各位行家多交流
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真诚的心可以感受！
1楼 2014-12-25 21:55:40
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
CMC是一种底物，但是分子量不固定，大致可以分为高中低粘度三种。如果是高粘度的，即使浓度较低也会很粘稠，反而阻碍了酶和底物的接触面，造成浓度越高测定得到的酶活力越低的现象。

你刚开始说的理论，其实并非正确的理论。而且你给出的信息很不详细，我先依据自身经验提出一点，如果不是这个原因，就要提供详细信息。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2014-12-25 22:09:14
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李志红

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-12-25 22:09:14
CMC是一种底物，但是分子量不固定，大致可以分为高中低粘度三种。如果是高粘度的，即使浓度较低也会很粘稠，反而阻碍了酶和底物的接触面，造成浓度越高测定得到的酶活力越低的现象。

你刚开始说的理论，其实并非 ...

我也想请教你一个问题，我测酶活用的四种不同的底物，滤纸，脱脂棉，CMC和水杨素，水杨素是测β-葡萄糖苷酶酶活的底物，可是测出来的吸光度很低，0.002左右，我怎样才能把吸光度提上去呢，是单纯增加酶的量还是提高纤维素酶的浓度或者水杨素底物不够我应该再多加一点水杨素作为底物呢
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3楼2015-01-20 08:34:56
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long_haihu

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 李志红 at 2015-01-20 08:34:56
我也想请教你一个问题，我测酶活用的四种不同的底物，滤纸，脱脂棉，CMC和水杨素，水杨素是测β-葡萄糖苷酶酶活的底物，可是测出来的吸光度很低，0.002左右，我怎样才能把吸光度提上去呢，是单纯增加酶的量还是提高 ...

吸光度低可以理解为生成的还原糖量较少，只要可以提高还原糖的量的因素，都可以考虑提高，比如增加酶的用量，增加底物用量，显色剂的用量等等。个人建议
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真诚的心可以感受！
4楼2015-01-20 11:53:04
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