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sunnjjian金虫 (小有名气)
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SDS-PAGE结果与预测有偏差。 已有3人参与
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跪求各位大神解答：用的PET32a做原核表达，目的基因编码499个氨基酸。SDS-PAGE结果显示差好多啊，是不是我跑胶时间有点长？跑了近5小时，溴酚蓝才到达底端。 SDS-PAGE.png |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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2楼2014-12-21 07:56:50
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3楼2014-12-21 09:43:22
liuderong
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sunnjjian: 金币+50 2014-12-31 11:08:44
sunnjjian: 金币+50 2014-12-31 11:08:44
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1.但用慢可能是聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系： 聚丙烯酰胺凝胶浓度（%T） 蛋白质分离范围/kd 5 36—200 6 30—200 8 20—175 10 15—150 12 10—100 15 6—50 浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。 楼主电泳的时间长，可能是蛋白质相对分子量超出了分离胶分离的范围而无法或者很难通过分离胶，或者说目的蛋白质在分离胶里走不动了。 2.目的蛋白质有499个氨基酸残基，相对分子量大约为54890道尔顿，和你的电泳图差的太远了。原因1，可能是凝胶浓度不合适，蛋白质根本跑不动；原因2，表达的蛋白质提前终止了或者讲解了；原因3，SDS变性目的蛋白质不完全，使得蛋白质的空间结构没有成为线型，构成了构建位阻。 你想要具体确定原因很容易，不过今天，我很不爽，不想再讨论了。 |
6楼2014-12-31 00:04:39
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8楼2014-12-31 00:10:55
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