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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE结果与预测有偏差。
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sunnjjian

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE结果与预测有偏差。 已有3人参与

跪求各位大神解答：用的PET32a做原核表达，目的基因编码499个氨基酸。SDS-PAGE结果显示差好多啊，是不是我跑胶时间有点长？跑了近5小时，溴酚蓝才到达底端。

SDS-PAGE结果与预测有偏差。
SDS-PAGE.png
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1楼 2014-12-21 07:37:08
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sunnjjian

金虫 (小有名气)
难道是没诱导出来吗？
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2楼2014-12-21 07:56:50
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sunnjjian

金虫 (小有名气)
3楼2014-12-21 09:43:22
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-21 23:09:24
marker好好的，胶和电泳应该没有问题。可能是没有诱导出来，你的空白对照是哪个泳道？你用多大的胶和多大的电压跑胶啊，怎么会要5小时！
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4楼2014-12-21 10:11:56
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君酷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
五百个氨基酸分子量是多大？

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5楼2014-12-21 10:12:01
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sunnjjian: 金币+50 2014-12-31 11:08:44
1.但用慢可能是聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度（%T） 蛋白质分离范围/kd
5                        36—200
6                        30—200
8                        20—175
10                       15—150
12                       10—100
15                        6—50
浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。
楼主电泳的时间长，可能是蛋白质相对分子量超出了分离胶分离的范围而无法或者很难通过分离胶，或者说目的蛋白质在分离胶里走不动了。
2.目的蛋白质有499个氨基酸残基，相对分子量大约为54890道尔顿，和你的电泳图差的太远了。原因1，可能是凝胶浓度不合适，蛋白质根本跑不动；原因2，表达的蛋白质提前终止了或者讲解了；原因3，SDS变性目的蛋白质不完全，使得蛋白质的空间结构没有成为线型，构成了构建位阻。

你想要具体确定原因很容易，不过今天，我很不爽，不想再讨论了。
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6楼2014-12-31 00:04:39
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

还有一个原因，你的认为是目的蛋白质的蛋白质根本不是你诱导的蛋白质，是别的蛋白质。
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7楼2014-12-31 00:08:15
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
更正：原因3，SDS变性目的蛋白质不完全，使得蛋白质的空间结构没有成为线型，构成了空间位阻。
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8楼2014-12-31 00:10:55
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sunnjjian

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-12-31 00:10:55
更正：原因3，SDS变性目的蛋白质不完全，使得蛋白质的空间结构没有成为线型，构成了空间位阻。

太感谢啦
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9楼2014-12-31 11:09:44
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
没有0对照吗？好像没表达

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2015-01-01 13:24:15
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