应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 其它 » 关于高效液相色谱HPLC 梯度洗脱的问题
51/1返回列表
查看: 3012  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

海浪016

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于高效液相色谱HPLC 梯度洗脱的问题 已有4人参与

我有个样品是用HPLC梯度洗脱 来进行液相分析，但是配出来的流动相在洗脱过程中的主峰出峰时间总是变化，比如说配了一瓶流动相 出峰时间为35min，再配一瓶流动相打样的时候主峰出峰时间可能就变成了25min或45min。请教一下各位虫友，这可能是什么原因？
说明一下：1、我配制的流动相A为磷酸二氢铵缓冲液，PH用磷酸调节为3.1，该缓冲液过滤后经过超声后使用。梯度洗脱的流动相B为色谱乙腈。
                  2、在整个过程中其他条件都相同，比如所用仪器相同、柱温相同、色谱柱相同，进样量、标准品相同、检测波长相同。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-25 21:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuecen

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 海浪016 at 2014-11-26 08:56:32
我的样品是酸性的，等电点是在3.5-4.0。这个方法是我们这里成品的标准检验方法。我想是不是流动相中缓冲盐没有溶解完全导致的？...

应该不是由于缓冲盐没有溶解所致，按说PH3.1也还好啊。如果是现成的检验标准的话，那么分析员配的流动相应该是比您配的流动相PH偏低一点点，由固定的人员来配置流动相A好了。我个人认为也许是缓冲盐称量多了一点点，也许是调PH值的习惯不同造成的，总之应该是人为误差，每个人的实验习惯不同，与其纠结在此，不如由一个人来完成流动相的配置尽早完成实验的好。
赞一下 回复此楼
8楼2014-11-26 09:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

yuecen

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
海浪016: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-11-26 08:59:43
您的流动相是偏酸性的，样品出峰在25-45min之间，说明样品在这个PH条件下比较敏感，或者说是正好在它的敏感点上，建议查查样品的PKA或PKB的值，使流动相的PH值跳出样品的敏感范围就好了。我猜您的样品是有些偏酸性的，所以估计PH增加2-3个就好了，但那样可能会造成样品出峰靠前，如果您是做有关物质不能满足要求的话，就只好考虑换个流动相啦
赞一下 回复此楼
2楼2014-11-25 23:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwmgyp

版主 (知名作家)

搬砖将

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
海浪016: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-11-26 08:59:59
出现这么大的偏差,直觉不是方法的事儿,对比一下色谱柱是否出现问题,还有仪器状态是否良好,多半是仪器系统出了问题,观察一下系统压力有没有波动很大.
赞一下(1人) 回复此楼
gwmgyp
3楼2014-11-26 08:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海浪016

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gwmgyp at 2014-11-26 08:14:32
出现这么大的偏差,直觉不是方法的事儿,对比一下色谱柱是否出现问题,还有仪器状态是否良好,多半是仪器系统出了问题,观察一下系统压力有没有波动很大.

压力、仪器都是正常的。就是换一瓶流动相后出峰时间就有可能变化了。一开始我认为是流动相的PH有问题，但测定后PH基本相同，再说对于一种成品的标准检验方法来说，流动相PH的略微变化应该对主峰的出峰时间影响很小。
后来发现分析中心一分析员配出来的流动相总是在40-45分钟左右，而我重新按方法配出来的一般在30分钟左右，所以我想是不是在溶解缓冲盐的过程中是不是没有溶解完全。请问一下，在流动相配置的过程中缓冲盐的浓度对出峰时间的影响？
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-26 08:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +9 Ymlll 2026-03-18 12/600 2026-03-20 00:01 by 23Postgrad
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分，有科研经历，求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 274求调剂 +6 S.H1 2026-03-18 6/300 2026-03-19 09:34 by 花店相见
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 5/250 2026-03-18 11:13 by QGZDSYS
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭