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OD值偏高的问题 已有1人参与
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| 我是通过抗原免疫后测定血清中抗体效价问题，包被抗原5ug/ml,每孔100ul；封闭；血清采用倍比稀释，1:10,1:20……1:6400，每孔100ul；二抗结合，1:5000稀释；底物结合。最后结果对照组和实验组OD值偏高，高的达到了2.3左右，对照组OD值相对低一点，但是实验组与之相比未达到显著，求高人指点下问题出在哪了？bb不多，先谢过了！ |
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我是通过抑制素抗原免疫獭兔后测定抑制素（inhibin）抗体效价，下面是我的实验方案 1 用包被缓冲液将inhibin（当初注射用的抗原，inhibin完全重组蛋白）稀释至5ug/ml，每孔100ul，4℃过夜。次日洗涤三次，每次两分钟。 2 动物血清梯度稀释（1:10 1:100……1:1000000）后来改为（1:10,1:20……），每孔100ul，室温孵育1h，洗涤三次，同时做空白对照，阴性对照（就是我在实验中设的对照，未注射抗原） 3 加入新鲜稀释的酶标二抗（羊抗兔），1:5000稀释，100ul，室温孵育45min，洗涤 4 加入底物显色液TMB，新鲜配制，100ul每孔，室温15min 5 加2M 硫酸 200ul每孔，终止 6 elisa检测仪检测450nm处OD值 我原本是打算：比较实验组和阴性对照组的OD值确定阳性阴性的，但是测定的OD值（1）OD值普遍较高；（2）虽然同一稀释度下，实验组OD值高于对照组，但没有达到判定阳性的水平。可以确定的是：实验组中肯定有抑制素抗体，因为通过其他途径的激素变化已经确定了。是不是试验步骤 加量方面存在问题呀？？求指导 |
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