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窝窝梦佳

银虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体转化 已有1人参与

T载体（pUCm-T）连接目的基因后的质粒可以直接用于真菌的原生质体转化吗？
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1楼 2014-11-16 21:40:20
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-11-17 09:27:16
窝窝梦佳: 金币+4 2014-11-20 10:12:47
不可以的，首先抗性基因不能正常表达，其次，转化进去后不能在真菌细胞中稳定存在，会被降解！
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Tobeornottobe,that'saproblem
2楼2014-11-17 08:47:40
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15195997166

金虫 (小有名气)
不造哎 梦梦同学
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简单而快乐
3楼2014-11-17 08:55:44
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窝窝梦佳

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by niushuaiji at 2014-11-17 08:47:40
不可以的，首先抗性基因不能正常表达，其次，转化进去后不能在真菌细胞中稳定存在，会被降解！

我的目的基因是从真菌中克隆获得的基因，中间插入一段抗性基因（构建的重组基因两边有同源臂），然后再导回到原始真菌中。这样也不可以连接T载体再导回去吗？那需要如何导进去？
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4楼2014-11-20 09:53:52
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟
引用回帖:
4楼: Originally posted by 窝窝梦佳 at 2014-11-20 09:53:52
我的目的基因是从真菌中克隆获得的基因，中间插入一段抗性基因（构建的重组基因两边有同源臂），然后再导回到原始真菌中。这样也不可以连接T载体再导回去吗？那需要如何导进去？...

你的目的如果是要同源重组的话，估计可以。但是，还要看抗性基因能否正常表达，这关系到转化过的筛选。即使有同源壁，其介导的同源重组远非我们想象的那么简单。为什么非要用T载体，找个真菌相关的表达载体去转化不是更好！
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Tobeornottobe,that'saproblem
5楼2014-11-20 10:33:17
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