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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白产量低，欲更换载体进行表达优化，请教~
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legend811

禁虫 (小有名气)
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1楼 2014-10-26 21:50:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cnzpli

金虫 (正式写手)
楼主威武 没学过分子克隆都能做原核表达

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7楼2014-10-26 23:37:59
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-27 00:24:36
融合到GST上试试，也可以试试用Rosrtta菌株

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2楼2014-10-26 21:59:59
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legend811

禁虫 (小有名气)
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3楼2014-10-26 22:06:40
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enzyming

新虫 (小有名气)
可行

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4楼2014-10-26 22:36:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
legend811: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-10-27 02:49:04
引用回帖:
3楼: Originally posted by legend811 at 2014-10-26 22:06:40
我也在考虑更换菌株。如果更换载体的话，请问是怎么操作的啊？将现有的载体质粒，双酶切后，胶回收获得目的基因，然后将回收的目的DNA片段与另一新的空载体进行双酶切后连接，可行吗？...

你只要阅读框对准了，没问题

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5楼2014-10-26 22:42:57
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legend811

禁虫 (小有名气)
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6楼2014-10-26 22:46:04
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legend811

禁虫 (小有名气)
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8楼2014-10-27 00:04:17
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-10-26 22:42:57
你只要阅读框对准了，没问题
...

目的基因自己带个起始密码子不就行了？
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怎知一死生为虚诞？
9楼2014-10-28 07:45:08
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刘洪岩

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
legend811(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-29 08:52:34
如果你准备换的载体，酶切位点和原来的一样，就用原来的引物，用质粒或者菌株作为模版，进行PCR，得到的产物再进行酶切，连接，表达；如果你准备换的载体，酶切位点和原来的不一样，就重新设计引物，然后用质粒或者菌作为模版，进行PCR，得到的产物酶切，连接到新载体，然后表达。
做表达是很烦的事情，尤其是小肽。我原来也做过小肽，不一定是载体的问题，也可能是菌株的问题，其他的条件也是需要摸索优化的。
希望楼主成功！
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过好每一天，走好每一步
10楼2014-10-28 08:51:32
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