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gouhuange

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助T-RFLP数据分析 已有1人参与

各位大神,江湖救急呀!!!
最近在做空气微生物种群多样性,用的是T-RFLP,这是从从生工返回来的数据(见附件)
我将Excel数据带入mica(http://mica.ibest.uidaho.edu/runtrflp.php)在线数据库比对,不知道Select Database那一项该选择什么,还有Sensitivity,Window (Bin) Size,这两项参数大神们都是怎么设置的?我把Sensitivity都设置为0,Window (Bin) Size设置的是1(想着参数设置的越低,结果应该越准确),可是出来的结果太多了,有十几万条带,该怎么筛选啊?
看别人文章里是把片段大小小于50和大于500,以及荧光值占总数小于百分之一的片段都去掉了,那我想问一下这个步骤是在Excel处理完以后才用数据库比对,还是直接把返回回来的所有片段大小带进去mica比对以后去除小于50和大于500,以及荧光值占总数小于百分之一所代表的微生物呢?我按照前一种方法(先去掉那些该去除的再比对)做的时候总是显示404 NOT FOUND。
还有我看别人说mica数据库貌似只能比对细菌的,那真菌的在那里比对呢?


以前没怎么接触过微生物这方面,问题有点多,请各位大神赐教。

求助T-RFLP数据分析
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求助T-RFLP数据分析-1
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by gouhuange at 2014-10-31 23:41:54
您好,我看到很多人都做分子克隆确定准确的微生物,但是也有看到说将T-RFLP结合分子克隆方法确定准确的微生物,我想这两者之间有关系吗??是不是分子克隆完以后,将以一定的歧化度划分好OUT以后,将它与T-RFLP得到 ...

正确做法是拿测序过的单克隆菌落作为DNA模版做PCR和T-RFLP,得到的单峰和测序序列的酶切位点是一一对应的。
7楼2014-11-01 11:58:07
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gouhuange: 金币+1, ★有帮助, 谢谢啦,但是,我目前只做酶切,没有测序。也就是说只能大致预测,不能明确知道是那种微生物是吧? 2014-10-24 11:56:52
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助! 2014-10-24 15:33:48
T-RFLP的结果要结合测序技术才能弄清楚每个峰代表什么,同样是150bp,可能对应很多种类的微生物。不同批次上机结果甚至可能会有横坐标的偏移,这次是150,下次没准就148了。
想预测准确一点就做克隆测序吧

我们以前做T-RFLP从来都是自己分析,不依赖mica。
2楼2014-10-24 11:10:28
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

不做测序就不能明确知道是哪种微生物。只有功能基因的T-RFLP用T-RF长度预测会比较准确(往往只有几个峰),全细菌或全真菌预测不准确。想发SCI就老老实实做测序吧
3楼2014-10-24 12:08:07
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gouhuange

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by peterrjp at 2014-10-24 12:08:07
不做测序就不能明确知道是哪种微生物。只有功能基因的T-RFLP用T-RF长度预测会比较准确(往往只有几个峰),全细菌或全真菌预测不准确。想发SCI就老老实实做测序吧

测序太贵了,老板不答应啊
4楼2014-10-24 13:09:13
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