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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 双向电泳时间安排
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

[求助] 双向电泳时间安排已有2人参与

我将要进行双向电泳的实验，这个实验时间跨度很长，有的部分可能需要12h以上，这在时间安排上可能会有一点问题。想请教一下各位有经验的虫子，水化-第一向-第二向-染色脱色，这几个步骤你们大概都花费多久时间，两三天内完成一个周期的话时间大致需要如何安排（白天做哪一步，晚上做哪一步）？最好的有好心人奉献一下17cm及以上胶条的实验经验和建议~多谢多谢！
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欲速则不达
1楼2014-10-22 11:00:59
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
大家帮帮忙啊
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欲速则不达
2楼2014-10-22 12:39:19
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晓之梦魇

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

晚上7点多开始，配制水化上样缓冲液，胶条提前拿出至室温，还有水化盘平衡，基本上9点钟开始水化，过夜
然后第二天早上9点开始聚焦，聚焦时间一般需要10个小时以上，你可以最后一步设置500v  20h，过夜
聚焦开始后，洗板，等差不多干，喷上酒精，下午或者晚上提前装板
然后第三天早上9点开始配胶，然后基本上12点之前可以跑上第二向，第二向一般跑6~8小时，然后晚上染色，如果是考染就过夜，第四天早上起来脱色，成像即可；如果是银染，晚上固定，第四天早上开始银染过程。
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3楼2014-11-13 12:03:25
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是这样做的：
第一天上午水化，选择胶内进样，样品加在水化液里面，一起吸进去，这样水化和一向一起设置程序。
第一天下午洗板，晚上配胶，配好放置过夜，蒙上保鲜膜。
第二天上午一向结束，还原烷化，准备第二向的胶槽、缓冲液等，随后第二向。
二向结束后不急的话就固定过夜，着急的话当天晚上染色。
这样做有一个缺点，就是没法检测第一向的电流电压情况。所以只有确定没问题，能顺利升压到1万伏的样品我才这么做。
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4楼2014-11-14 11:17:17
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