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米花芬芳

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌DGGE跑胶怎么跑出来在中间有一条很粗很粗的条带下面却没什么条带了啊!求助求助! 已有4人参与


真菌DGGE跑出来的胶在中间有一条很粗还是波浪形的条带,上面泳道颜色很深,下面浅,而且下面没有什么条带,用的银染法,50V跑了20个小时,百分之七的胶,浓度梯度是 25-45%,也试过20-45%,都是这个样子,请问是什么原因啊?急急急!
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c0985338

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.??????fDNA????????????????DGGE???????D?V??
??????????^????????DNA clean kit???RNA??peptide??protein?????
?p?????е??s?|??
????????z????????????DNA?????
?K?M???p???s?|??

2.????????DNA???????????r??e??
????????DNA??????????genomic DNA?????????????
????????PCR?a????????????????
?????touchdown PCR????????????????a????????^????????
???????????25%~40%?????????
????50V??20С?r??
??????????η??xЧ??????????e??
?Y?????ψD?V?c?l??????п??????????F??
???????ε?DNA???????
??M????_?J??????????F??
??????E. coli cloning??????????_?J???λ?????}?s???
?????K????????????????????????????ě]???}??
?????????????
???J???????????С?cG+C content??????????????
??????~
7楼2015-01-07 14:14:28
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暖如夏天

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

2楼2014-10-23 12:00:25
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米花芬芳

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 暖如夏天 at 2014-10-23 12:00:25
我现在也是和你一样,就中间有一条带,快崩溃了,我是8%的胶,25%-40%

我的是 7%的胶,20%-45%,唉,你做出来了吗?我的还没做出来呢,这是什么原因啊!我试过50V电压20小时,也试过80V电压12小时,还有120V电压5小时,都不行
3楼2014-10-27 19:54:50
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lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看你条带跑的还是很不错啊,电泳时间也是没问题的。只是胶上半部跟下面几乎没有条带,建议把胶浓度梯度的范围缩小点儿试试看.(PS:如果有条件做做垂直电泳先试好条件再来看看)其他就是银染显色时间的问题,感觉你的背景颜色有点染深了。
新手入门求各位大神指导
4楼2014-11-13 15:30:39
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