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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌DGGE跑胶怎么跑出来在中间有一条很粗很粗的条带下面却没什么条带了啊！求助求助！
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米花芬芳

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌DGGE跑胶怎么跑出来在中间有一条很粗很粗的条带下面却没什么条带了啊！求助求助！ 已有4人参与


真菌DGGE跑出来的胶在中间有一条很粗还是波浪形的条带，上面泳道颜色很深，下面浅，而且下面没有什么条带，用的银染法，50V跑了20个小时，百分之七的胶，浓度梯度是 25-45%，也试过20-45%，都是这个样子，请问是什么原因啊？急急急！
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1楼 2014-10-05 17:32:02
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暖如夏天

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
2楼2014-10-23 12:00:25
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米花芬芳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 暖如夏天 at 2014-10-23 12:00:25
我现在也是和你一样，就中间有一条带，快崩溃了，我是8%的胶，25%-40%

我的是 7%的胶，20%-45%，唉，你做出来了吗？我的还没做出来呢，这是什么原因啊！我试过50V电压20小时，也试过80V电压12小时，还有120V电压5小时，都不行
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3楼2014-10-27 19:54:50
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lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看你条带跑的还是很不错啊，电泳时间也是没问题的。只是胶上半部跟下面几乎没有条带，建议把胶浓度梯度的范围缩小点儿试试看.（PS：如果有条件做做垂直电泳先试好条件再来看看)其他就是银染显色时间的问题，感觉你的背景颜色有点染深了。
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新手入门求各位大神指导
4楼2014-11-13 15:30:39
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老脸挂不住

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你灌胶成功吗？做的胶一定要好呀，还有pcr引物怎么样，可以再多选一对引物做个试试，跑胶我选的是120v,5小时，做出来效果还不错
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我要这天，再遮不住我眼要这地，再埋不了我心要这众生，都明白我意要那诸佛，都烟消云散
5楼2014-11-13 17:44:42
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mosejinnian

金虫 (初入文坛)
楼主现在做出来了吗？我也遇到相同情况，能分享点经验吗？谢谢～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2015-01-07 01:22:55
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c0985338

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.??????fDNA????????????????DGGE???????D?V??
??????????^????????DNA clean kit???RNA??peptide??protein?????
?p?????е??s?|??
????????z????????????DNA?????
?K?M???p???s?|??

2.????????DNA???????????r??e??
????????DNA??????????genomic DNA?????????????
????????PCR?a????????????????
?????touchdown PCR????????????????a????????^????????
???????????25%~40%?????????
????50V??20С?r??
??????????η??xЧ??????????e??
?Y?????ψD?V?c?l??????п??????????F??
???????ε?DNA???????
??M????_?J??????????F??
??????E. coli cloning??????????_?J???λ?????}?s???
?????K????????????????????????????ě]???}??
?????????????
???J???????????С?cG+C content??????????????
??????~
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7楼2015-01-07 14:14:28
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米花芬芳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mosejinnian at 2015-01-07 01:22:55
楼主现在做出来了吗？我也遇到相同情况，能分享点经验吗？谢谢～

做了三个月还没做出来现在就感觉20%-50%的50V20小时的好一点
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8楼2015-01-07 16:37:46
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米花芬芳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lance-tan at 2014-11-13 15:30:39
看你条带跑的还是很不错啊，电泳时间也是没问题的。只是胶上半部跟下面几乎没有条带，建议把胶浓度梯度的范围缩小点儿试试看.（PS：如果有条件做做垂直电泳先试好条件再来看看)其他就是银染显色时间的问题，感觉你的 ...

请问你可以在线指导我一下吗？图出来了不会分析，我QQ578412182，跪谢！
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9楼2015-03-04 21:46:35
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米花芬芳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 老脸挂不住 at 2014-11-13 17:44:42
你灌胶成功吗？做的胶一定要好呀，还有pcr引物怎么样，可以再多选一对引物做个试试，跑胶我选的是120v,5小时，做出来效果还不错

你好，请问你可以在线指导一下吗？图跑出来了不会分析，跪谢！我QQ578412182
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10楼2015-03-04 21:47:46
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