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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 问咪唑洗脱完目标蛋白后，咪唑在柱上与镍结合，这个咪唑要不要除去
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新虫 (正式写手)

[交流] 问咪唑洗脱完目标蛋白后，咪唑在柱上与镍结合，这个咪唑要不要除去 已有10人参与

如题，否则会不会影响下次的吸附纯化？
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1楼 2014-10-04 16:33:11
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灵岩苏

禁言 (小有名气)
★
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本帖内容被屏蔽
7楼2014-11-18 14:44:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
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参考说明书，如果不洗掉柱上的咪唑，下次蛋白不直接洗下去了么？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-10-04 18:19:13
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新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-10-04 18:19:13
参考说明书，如果不洗掉柱上的咪唑，下次蛋白不直接洗下去了么？

怎么洗掉
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3楼2014-10-05 07:22:06
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璧月

捐助贵宾 (正式写手)
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正常不就是水洗，20％乙醇洗，保存吗？

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4楼2014-10-05 07:48:12
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新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 璧月 at 2014-10-05 07:48:12
正常不就是水洗，20％乙醇洗，保存吗？

咪唑结合在镍柱上，可能是配位键、离子键、和疏水作用的共同作用，水洗能洗掉咪唑吗？同样在离子交换柱中最后一步一般有用1M的NaCl洗去全部蛋白，同问NaCl能用水洗掉吗？
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5楼2014-10-05 11:06:47
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super_mm

金虫 (小有名气)
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当然要洗掉啊 用无咪唑的缓冲液或者水都可以洗掉，咪唑或His标签和镍柱是浓度依赖的竞争性结合的，所以用完柱子和下次上样前都要大量冲洗柱子的
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6楼2014-10-11 10:52:24
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
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咪唑肯定要洗掉，好像是用盐酸交换。
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8楼2014-11-19 13:23:51
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xiaosheng123

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 灵岩苏 at 2014-11-18 14:44:26
这个可能和镍柱有关，你需要参考说明书的，建议需要洗掉的，我用七海的镍柱做实验，没差。

听说七海的镍柱载量挺高的，不知道是不是真的，载量大概有在多少？
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9楼2014-11-26 15:54:56
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hajierlove

铜虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by 灵岩苏 at 2014-11-18 14:44:26
这个可能和镍柱有关，你需要参考说明书的，建议需要洗掉的，我用七海的镍柱做实验，没差。

七海的镍柱效果怎么样？
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踏实
10楼2014-12-01 17:07:33
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