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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pCAMBIA载体抗性问题
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] pCAMBIA载体抗性问题 已有2人参与

找别人要了一个pCAMBIA99-1载体，说的是氯霉素抗性，氯霉素工作浓度多大呢？我12.5ug/ml的板子也不长啊。另外，还有潮霉素抗性，潮霉素是转基因筛选的吧，能不能筛选大肠杆菌呢？
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
1楼 2014-09-28 20:31:27
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fanwq258

木虫 (正式写手)
求解惑
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
2楼2014-09-29 09:02:04
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pCAMBIA  载体自身带有KAN 抗性的。。换个抗性试试
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学习再学习，努力再努力。
3楼2014-09-29 15:45:39
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jian212 at 2014-09-29 15:45:39
pCAMBIA  载体自身带有KAN 抗性的。。换个抗性试试

不行呀，这个载体是pCAMBIA 1200改造过的，1200是氯霉素抗性
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
4楼2014-09-29 16:36:20
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by fanwq258 at 2014-09-29 16:36:20
不行呀，这个载体是pCAMBIA 1200改造过的，1200是氯霉素抗性...

为什么要改造抗性部分，不解？
氯霉素工作浓度25ug/ml，我们用的这个浓度，按理来说你的浓度更低不应该不长的。
重新倒下平板试试吧，不行的话在考虑是不是质粒降解完了？
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学习再学习，努力再努力。
5楼2014-09-29 16:56:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fanwq258: 金币+5 2014-09-29 18:36:44
标准用量是25，如果不OK说明你的载体有问题，你要做什么，搞个1200这么费劲，氯霉素比卡纳贵吧，还不方便，我这有cambia的其他载体，留下QQ聊

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6楼2014-09-29 17:06:21
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-09-29 17:06:21
标准用量是25，如果不OK说明你的载体有问题，你要做什么，搞个1200这么费劲，氯霉素比卡纳贵吧，还不方便，我这有cambia的其他载体，留下QQ聊

氯霉素比较便宜吧，买的10g的才80多块钱。我跟别人要的载体是他们改造了启动子的，我不需要35s，自己弄有点儿麻烦，所以就找人要了。依然很感谢你.
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要么好好活，要么死，拒绝半死不活
7楼2014-09-29 18:35:37
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