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love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝测蛋白的标曲测定时,吸光度大于1 已有2人参与

如题,我是用的1mg/ml的BSA,考马斯亮蓝G-250配方:100mg考马斯亮蓝G-250,50ml95%的乙醇,120ml85&的磷酸,定容1000ml,滤纸过滤,棕色试剂瓶保存。都是刚配的,反应5min测的,除了BSA为0.1mg/ml时A595是小于1,但也有0.5以上,其他浓度的都是1以上,求各位大神帮忙分析下,为什么测的吸光度那么高,谢谢!
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justloveinuyasha
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梁以薰

木虫 (著名写手)

我测得也是。。。不知道为啥
如人饮水,冷暖自知
2楼2014-11-07 11:38:21
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木叶super

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 梁以薰 at 2014-11-07 11:38:21
我测得也是。。。不知道为啥

楼主做完了没?我最近在用考马斯亮蓝测蛋白含量,1ml去离子水+4ml的考马斯亮蓝溶液的空白都0.8多,郁闷啊,配制的考马斯亮蓝溶液我还过滤了的,发现在使用的时候还有悬浮的不溶的,我买的考马斯亮蓝是在国药买的呢,求解
人生,只要还有一线希望,就还有无限可能
3楼2014-12-24 13:23:06
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梁以薰

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 木叶super at 2014-12-24 13:23:06
楼主做完了没?我最近在用考马斯亮蓝测蛋白含量,1ml去离子水+4ml的考马斯亮蓝溶液的空白都0.8多,郁闷啊,配制的考马斯亮蓝溶液我还过滤了的,发现在使用的时候还有悬浮的不溶的,我买的考马斯亮蓝是在国药买的呢 ...

你参比用的什么呀?我用缓冲液+考马斯参比倒是好了,不过我测着重复性太低考虑换方法了。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
如人饮水,冷暖自知
4楼2014-12-25 00:11:32
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木叶super

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 梁以薰 at 2014-12-25 00:11:32
你参比用的什么呀?我用缓冲液+考马斯参比倒是好了,不过我测着重复性太低考虑换方法了。。。
...

我参比用的是1ml去离子水+4ml考马斯亮蓝,我在国药买的考马斯亮蓝的纯度只有85%,好坑啊,昨天我用0.8微米的滤膜过滤了一下,好一点但还是有悬浮的不容的
人生,只要还有一线希望,就还有无限可能
5楼2014-12-25 10:44:59
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梁以薰

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 木叶super at 2014-12-25 10:44:59
我参比用的是1ml去离子水+4ml考马斯亮蓝,我在国药买的考马斯亮蓝的纯度只有85%,好坑啊,昨天我用0.8微米的滤膜过滤了一下,好一点但还是有悬浮的不容的...

我用缓冲液参比出问题了,所以用缓冲液加考马斯亮蓝就好了啊~我用的药品是师姐以前买的,没注意是啥的~~~
如人饮水,冷暖自知
6楼2014-12-25 10:48:28
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D1ngX1n

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 梁以薰 at 2014-12-25 10:48:28
我用缓冲液参比出问题了,所以用缓冲液加考马斯亮蓝就好了啊~我用的药品是师姐以前买的,没注意是啥的~~~...

请问缓冲是磷酸还是什么的缓冲,加1mL缓冲进5mL染液大概吸光度是多少啊?我用的Tris-HCl缓冲和染液也吸光值0.68了,虽然颜色还是棕色没变蓝,但是数值太大了。
7楼2016-07-10 20:46:05
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