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108391铜虫 (初入文坛)
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[交流]
为什么重组大肠杆菌在表达培养前先要扩大培养？ 已有3人参与
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众所周知，大肠杆菌转化质粒后铺平板，挑单菌落再扩大培养（如在50ml培养瓶中摇10ml）过夜，第二天再加入扩大培养菌液到表达培养基（我们实验室是500ml培养基加入5ml扩大培养菌液，以下称为“常规方法”） 由于前段时间噬菌体污染，我偶然试了一下直接挑单菌落到表达培养基中（500ml培养基），摇起来后加入诱导剂，蛋白也表达了，SDS-PAGE电泳条带与之前用常规方法表达的同一种蛋白条带位置一致。但有几个问题我还很不解，请大家不吝赐教： 1. 为什么要先扩大培养？直接挑单菌落到表达培养基中似乎也可行，还更节省时间，为什么不这样做？ 2. 我这次表达的蛋白上Ni柱纯化和Superdex75分子筛纯化（机器用的AKTA)，都出现出峰稍延后现象，比如常规方法表达的蛋白Ni柱是换洗脱液后18ml开始出峰，分子筛是54ml开始出峰,59.5ml时到峰尖，这次直接挑单菌落表达培养的是Ni柱20ml、分子筛56ml开始出峰，60.35ml时到峰尖。这怎么解释？ |
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1. 为什么要先扩大培养？直接挑单菌落到表达培养基中似乎也可行，还更节省时间，为什么不这样做？ ——因为细胞在不断的分裂生长，扩大培养可以快速的提高生物量，并且均一性好，对蛋白表达有利！ 2. 我这次表达的蛋白上Ni柱纯化和Superdex75分子筛纯化（机器用的AKTA)，都出现出峰稍延后现象，比如常规方法表达的蛋白Ni柱是换洗脱液后18ml开始出峰，分子筛是54ml开始出峰,59.5ml时到峰尖，这次直接挑单菌落表达培养的是Ni柱20ml、分子筛56ml开始出峰，60.35ml时到峰尖。这怎么解释？ ——两次缓冲液都是一样的吗？不同批次的实验存在一定的误差很正常！ |
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monky
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108391
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