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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 为什么重组大肠杆菌在表达培养前先要扩大培养？
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铜虫 (初入文坛)

[交流] 为什么重组大肠杆菌在表达培养前先要扩大培养？ 已有3人参与

众所周知，大肠杆菌转化质粒后铺平板，挑单菌落再扩大培养（如在50ml培养瓶中摇10ml）过夜，第二天再加入扩大培养菌液到表达培养基（我们实验室是500ml培养基加入5ml扩大培养菌液，以下称为“常规方法”）
由于前段时间噬菌体污染，我偶然试了一下直接挑单菌落到表达培养基中（500ml培养基），摇起来后加入诱导剂，蛋白也表达了，SDS-PAGE电泳条带与之前用常规方法表达的同一种蛋白条带位置一致。但有几个问题我还很不解，请大家不吝赐教：
1. 为什么要先扩大培养？直接挑单菌落到表达培养基中似乎也可行，还更节省时间，为什么不这样做？
2. 我这次表达的蛋白上Ni柱纯化和Superdex75分子筛纯化（机器用的AKTA)，都出现出峰稍延后现象，比如常规方法表达的蛋白Ni柱是换洗脱液后18ml开始出峰，分子筛是54ml开始出峰,59.5ml时到峰尖，这次直接挑单菌落表达培养的是Ni柱20ml、分子筛56ml开始出峰，60.35ml时到峰尖。这怎么解释？
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1楼 2014-08-15 22:41:47
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同问，我也觉得可以直接做没必要扩增，除非菌量太低了

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3楼2014-08-17 21:15:05
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nl2016

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1. 为什么要先扩大培养？直接挑单菌落到表达培养基中似乎也可行，还更节省时间，为什么不这样做？
——因为细胞在不断的分裂生长，扩大培养可以快速的提高生物量，并且均一性好，对蛋白表达有利！
2. 我这次表达的蛋白上Ni柱纯化和Superdex75分子筛纯化（机器用的AKTA)，都出现出峰稍延后现象，比如常规方法表达的蛋白Ni柱是换洗脱液后18ml开始出峰，分子筛是54ml开始出峰,59.5ml时到峰尖，这次直接挑单菌落表达培养的是Ni柱20ml、分子筛56ml开始出峰，60.35ml时到峰尖。这怎么解释？
——两次缓冲液都是一样的吗？不同批次的实验存在一定的误差很正常！
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2楼2014-08-16 21:47:25
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-17 21:15:05
同问，我也觉得可以直接做没必要扩增，除非菌量太低了

一般细菌鉴定的时候要第一部增菌目的是提高待检菌的生物量降低其他细菌，这样平板上容易挑出阳性。那么是不是也因为这个原因呢

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4楼2014-08-17 21:18:23
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monky

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌种扩增主要是从减少培养时间，提高表达量来考虑吧
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5楼2014-08-18 14:41:03
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