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电转化中感受态的制备用到哪些缓冲液 已有1人参与
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一直在做一个革兰氏阴性菌的转座子电击转化。转座效率低啊。感受态的制作都只用水洗细胞，水悬浮最终沉淀，想换电击缓冲液考察下。看过文献其他的菌有用HEPES、PIPES之类的，这些是非离子缓冲液，主要是稳定环境pH吧；还看到说Mg++会激活转座酶什么的，想说是否要加MgCl2，但它是盐，又怕影响电击；还有用蔗糖、MOPES什么的。各种各样的都有，原理还不太清楚。 转座子贵啊，不敢乱试，好迷茫！ 大家电转有用过什么其他缓冲液吗？求推荐求指点！ |
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馨-馨
银虫 (小有名气)
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- 在线: 55.3小时
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- 注册: 2011-09-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2014-08-11 14:24:02
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真的一定会击穿？馨馨有没听过所谓的低渗溶液环境有利于感受态细胞的制作。是不是加低浓度的MgCl2就会没事。The EZ-Tn5 Transposome can be electroporated into living cells where the EZ-Tn5 Transposase is activated by Mg2+ in the host’s cellular environment resulting in random insertion of the EZ-Tn5 Transposon into the host genomic DNA. 我的转座子说明书里面有这么一句话，所以很疑心是否要用到Mg2+ |
3楼2014-08-11 15:24:56
