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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒DNA转染遇到的一些问题
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_wuliao_

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒DNA转染遇到的一些问题 已有5人参与

本人是学化学专业的，现在交叉做点生物上的细胞转染实验，我用的是纳米材料转染PEGFP-C1质粒，用的是CHO细胞。我发现，每次用荧光显微镜看荧光的时候都能看到模模糊糊的，没办法聚焦的荧光，而且这个荧光也明显没有用lipsome 2000转染的量多，不知道这个荧光到底是哪来的？我的材料是没有荧光的，而且我用lipsome 2000转染过，荧光是非常强的，不知道我的实验遇到了什么问题。
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在每一个分享交流的瞬间感受爱的真挚与绵长
1楼 2014-07-25 14:00:45
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123小莜

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by _wuliao_ at 2014-07-25 15:42:22
我用纳米材料转染的目的就是想看下纳米材料到底能不能作为转染试剂。我困惑的地方就是我用lipsome 2000转染得到的荧光跟我用纳米材料转染得到的荧光是不一样的，lipsome 2000得到的荧光很强，而且很清晰。但是我用 ...

你好 我想问一下你做的转染直接用pEGFP-C1这个质粒转染吗 需要加目的基因吗
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9楼2014-09-06 21:32:39
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
_wuliao_(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-07-25 20:16:10
不是很明白你问的问题，你的材料是没有 荧光，但你转染的治理pEGFP-C1是表达GFP的，在荧光显微镜下能看到绿色的荧光
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-07-25 14:08:13
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_wuliao_

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-25 14:08:13
不是很明白你问的问题，你的材料是没有 荧光，但你转染的治理pEGFP-C1是表达GFP的，在荧光显微镜下能看到绿色的荧光

我用纳米材料转染的目的就是想看下纳米材料到底能不能作为转染试剂。我困惑的地方就是我用lipsome 2000转染得到的荧光跟我用纳米材料转染得到的荧光是不一样的，lipsome 2000得到的荧光很强，而且很清晰。但是我用纳米材料得到的荧光很弱。我不知道用纳米材料得到的荧光是不是GFP的荧光。如果不是的话，那这个弱弱的荧光有可能是什么东西呢
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在每一个分享交流的瞬间感受爱的真挚与绵长
3楼2014-07-25 15:42:22
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-25 22:01:50
_wuliao_: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-07-28 09:22:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by _wuliao_ at 2014-07-25 15:42:22
我用纳米材料转染的目的就是想看下纳米材料到底能不能作为转染试剂。我困惑的地方就是我用lipsome 2000转染得到的荧光跟我用纳米材料转染得到的荧光是不一样的，lipsome 2000得到的荧光很强，而且很清晰。但是我用 ...

“荧光不一样”是怎么不一样？强度不一样？波段不一样？

GFP是绿色荧光，excitation/emission的波段是488nm/509nm。我不是太明白你观察的方式，如果用同样的滤镜可以看到的话，应该就是同一荧光了。荧光强度跟转染量/表达量有很大关系。有可能你的纳米材料转染效率本身就没有lipsome 2000那么高。

你可以转染之后用流式测定一下转染率。并且做一下对照组，同时用纳米材料转染别的质粒，最好是带有外源标记基因但是非荧光的。比如表达人类表面抗原之类。以确认你的转染不会产生自身荧光。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
4楼2014-07-25 20:48:33
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