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_wuliao_木虫 (正式写手)
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[求助]
质粒DNA转染遇到的一些问题 已有5人参与
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| 本人是学化学专业的，现在交叉做点生物上的细胞转染实验，我用的是纳米材料转染PEGFP-C1质粒，用的是CHO细胞。我发现，每次用荧光显微镜看荧光的时候都能看到模模糊糊的，没办法聚焦的荧光，而且这个荧光也明显没有用lipsome 2000转染的量多，不知道这个荧光到底是哪来的？我的材料是没有荧光的，而且我用lipsome 2000转染过，荧光是非常强的，不知道我的实验遇到了什么问题。 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-25 22:01:50
_wuliao_: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-07-28 09:22:32
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“荧光不一样”是怎么不一样？强度不一样？波段不一样？ GFP是绿色荧光，excitation/emission的波段是488nm/509nm。我不是太明白你观察的方式，如果用同样的滤镜可以看到的话，应该就是同一荧光了。荧光强度跟转染量/表达量有很大关系。有可能你的纳米材料转染效率本身就没有lipsome 2000那么高。 你可以转染之后用流式测定一下转染率。并且做一下对照组，同时用纳米材料转染别的质粒，最好是带有外源标记基因但是非荧光的。比如表达人类表面抗原之类。以确认你的转染不会产生自身荧光。 |
4楼2014-07-25 20:48:33
7楼2014-07-28 19:00:00