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厚德求是木虫 (著名写手)
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[求助]
定点饱和突变方法求助已有2人参与
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求助！ 问题正如题目所说，本人课题涉及蛋白质工程，目前为止由定点突变技术寻找到几个对正向突变点。现在希望对其进行定点饱和突变，以期找到更好突变效果。 但是实验室没有过有类似工作经历的人，所以想跪求各位有过类似试验经验的虫友指点一二，大概问题主要有： 1，如何设计引物，是否和定点突变引物设计类似，希望随机突变的碱基用什么来表示？ 2，PCR体系如何建立，关键是用什么酶？ 3，Protocol如何设置，退火温度是否要和引物的Tm相关联，退火和延伸时间分别是多少？ 兄弟真的是第一次做，如果问了无知问题还请大侠包含~ |
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huangrui1988 
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4楼2014-07-15 18:53:57