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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定点饱和突变方法求助
汕头大学海洋科学接受调剂
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厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

[求助] 定点饱和突变方法求助 已有2人参与

求助！
问题正如题目所说，本人课题涉及蛋白质工程，目前为止由定点突变技术寻找到几个对正向突变点。现在希望对其进行定点饱和突变，以期找到更好突变效果。
但是实验室没有过有类似工作经历的人，所以想跪求各位有过类似试验经验的虫友指点一二，大概问题主要有：
1，如何设计引物，是否和定点突变引物设计类似，希望随机突变的碱基用什么来表示？
2，PCR体系如何建立，关键是用什么酶？
3，Protocol如何设置，退火温度是否要和引物的Tm相关联，退火和延伸时间分别是多少？
兄弟真的是第一次做，如果问了无知问题还请大侠包含~
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1楼 2014-07-12 14:40:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

跳跳豆芽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
厚德求是(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-15 18:50:32
厚德求是: 金币+3, ★有帮助 2014-07-17 18:42:24
厚德求是: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-11-23 20:37:21
可以用NNN表示也可以用NNK表示，其中K代表C/G。
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学无止境
3楼2014-07-15 14:29:34
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
你可以留QQ以及发序列给我，我帮你设计。
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4楼2014-07-15 18:53:57
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普通回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.
没人理，自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊？让公司合成难道就写“NNN”？请做过的大侠教我一下
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2楼2014-07-13 11:13:28
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厚德求是

木虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.
继续自己顶...我看我还是再找找文献什么的吧，但是有人能说一下自己当时是怎么做的就好了啦！
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5楼2014-10-15 10:01:50
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tea11111

新虫 (初入文坛)
楼主，我也有这个疑问，想知道做饱和突变，是每种突变都要设计一个相应的引物吗？还是有更好的方法？你最后是怎么做的
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6楼2015-07-11 10:45:13
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xl249848

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tea11111 at 2015-07-11 10:45:13
楼主，我也有这个疑问，想知道做饱和突变，是每种突变都要设计一个相应的引物吗？还是有更好的方法？你最后是怎么做的

我也想问这个问题
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7楼2018-03-02 10:02:58
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xl249848

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 厚德求是 at 2014-07-13 11:13:28
没人理，自己顶一下。。。我看到文献中说“用于定点饱和突变的引物序列”中有“NNN”它说代表“简并引物”这是什么意思啊？让公司合成难道就写“NNN”？请做过的大侠教我一下

我也想问饱和定点突变的问题，有相关资料可以分享吗
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8楼2018-03-02 10:07:12
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HHHH0099

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xl249848 at 2018-03-02 10:07:12
我也想问饱和定点突变的问题，有相关资料可以分享吗...

同求
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9楼2018-04-18 19:24:44
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冷血孤峰

银虫 (小有名气)
楼主，我也想问这个问题，我需要通过计算机来模拟突变最终用实验来验证。
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10楼2018-08-23 10:30:58
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