24小时热门版块排行榜    

查看: 2235  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] 关于EMSA实验的一些问题 已有2人参与

1、我合成的探针是在5‘端标记的生物素,合成好的是单链。那么在PCR上退火使两条探针形成双链之后是直接使用PCR产物进行下步实验还是对PCR产物进行纯化之后再使用?
2、我使用的试剂盒是Throme的,实验步骤里说要使用6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶,请问这个怎么配制?由于没有加入SDS,在电泳的时候要考虑蛋白自身的电荷吗?(如何保证蛋白电泳时的方向)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-21 09:38:38
可是我的只有25bp。。。...

我建议你不回收,直接跑试试。
8楼2014-07-22 10:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xy656691(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-16 19:48:58
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
   30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
   5xTBE                 2.4ml
   ddH2O                7.2ml
   10%AP                200ul
   TEMED                10ul
2楼2014-07-16 10:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-16 10:17:19
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
   30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
   5xTBE                 2.4ml
   ddH2O                7.2ml
   10%AP                200ul
   TEMED                10ul

谢谢,探针只有25bp大小,怎么纯化呢?一般的PCR纯化试剂盒只能纯化100bp以上的。
3楼2014-07-16 17:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很好谢谢 2014-07-18 10:49:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-16 17:38:38
谢谢,探针只有25bp大小,怎么纯化呢?一般的PCR纯化试剂盒只能纯化100bp以上的。...

只能用小片段回收试剂盒。一般的回收试剂盒回收不回来。我们用的是QIAEN的。
4楼2014-07-17 10:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见