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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞应该如何裂解
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[交流] 细胞应该如何裂解 已有5人参与

给细胞加了药 准备用HPLC测细胞内药物的含量。不知道应该如何裂解细胞
我们没有超声破碎仪。请问用做western的裂解液可以吗
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1楼 2012-12-04 20:54:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-12-05 17:37:00
要看你的HPLC柱子上什么buffer体系。含SDS的裂解液是不是太strong了。
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2楼2012-12-05 08:04:05
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wolfman840

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 多谢回答 2012-12-05 17:36:52
用注射水悬浮细胞后，置-80℃或者液氮中冻一夜，再取出，再冻，反复5次左右，细胞膜基本就破裂了。
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3楼2012-12-05 08:35:32
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2012-12-05 08:35:32
用注射水悬浮细胞后，置-80℃或者液氮中冻一夜，再取出，再冻，反复5次左右，细胞膜基本就破裂了。

注射水？是什么水？ 一般做这种实验 一个样品需要大概多少细胞？ 总觉得细胞就那么一点点，再一裂解然后萃取什么的  肯定量很少
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4楼2012-12-05 08:48:44
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jl860822

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-12-05 17:37:08
WB的裂解液应该不行吧，应该用柔和一点的裂解液
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5楼2012-12-05 14:36:19
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看天

木虫 (知名作家)
★
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引用回帖:
4楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-12-05 08:48:44
注射水？是什么水？ 一般做这种实验 一个样品需要大概多少细胞？ 总觉得细胞就那么一点点，再一裂解然后萃取什么的  肯定量很少...

纯水就好了吧 这样因为渗透压问题更容易涨破
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
6楼2012-12-05 17:37:45
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zm1912

金虫 (小有名气)
反复冻融诶...
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7楼2012-12-05 18:48:11
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 看天 at 2012-12-05 17:37:45
纯水就好了吧 这样因为渗透压问题更容易涨破...

非常感谢你的帮助
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8楼2012-12-05 22:03:44
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wolfman840

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纯水中的微生物会造成污染，如果没有注射用水，那就搞点超纯水做做。微生物限度低于10cfu的水比较理想。考虑渗透压的同时也要考虑微生物污染，冻融所要的时间比较长。你做HPLC测定，有个5ml细胞悬液就够了，细胞密度能到10的6次就可以。
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9楼2012-12-07 13:06:05
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