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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

[交流] 细胞应该如何裂解 已有5人参与

给细胞加了药 准备用HPLC测细胞内药物的含量。不知道应该如何裂解细胞
我们没有超声破碎仪。请问用做western的裂解液可以吗
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-12-05 17:37:00
要看你的HPLC柱子上什么buffer体系。含SDS的裂解液是不是太strong了。
2楼2012-12-05 08:04:05
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wolfman840

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+2, 多谢回答 2012-12-05 17:36:52
用注射水悬浮细胞后,置-80℃或者液氮中冻一夜,再取出,再冻,反复5次左右,细胞膜基本就破裂了。
3楼2012-12-05 08:35:32
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2012-12-05 08:35:32
用注射水悬浮细胞后,置-80℃或者液氮中冻一夜,再取出,再冻,反复5次左右,细胞膜基本就破裂了。

注射水?是什么水? 一般做这种实验 一个样品需要大概多少细胞? 总觉得细胞就那么一点点,再一裂解然后萃取什么的  肯定量很少
4楼2012-12-05 08:48:44
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jl860822

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-12-05 17:37:08
WB的裂解液应该不行吧,应该用柔和一点的裂解液
5楼2012-12-05 14:36:19
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看天

木虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by gigiloveu at 2012-12-05 08:48:44
注射水?是什么水? 一般做这种实验 一个样品需要大概多少细胞? 总觉得细胞就那么一点点,再一裂解然后萃取什么的  肯定量很少...

纯水就好了吧 这样因为渗透压问题更容易涨破
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
6楼2012-12-05 17:37:45
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zm1912

金虫 (小有名气)

反复冻融诶...
7楼2012-12-05 18:48:11
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gigiloveu

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 看天 at 2012-12-05 17:37:45
纯水就好了吧 这样因为渗透压问题更容易涨破...

非常感谢你的帮助
8楼2012-12-05 22:03:44
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wolfman840

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
纯水中的微生物会造成污染,如果没有注射用水,那就搞点超纯水做做。微生物限度低于10cfu的水比较理想。考虑渗透压的同时也要考虑微生物污染,冻融所要的时间比较长。你做HPLC测定,有个5ml细胞悬液就够了,细胞密度能到10的6次就可以。
9楼2012-12-07 13:06:05
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