应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 关于EMSA实验的一些问题
141/2返回列表12下一页
查看: 2347  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] 关于EMSA实验的一些问题 已有2人参与

1、我合成的探针是在5‘端标记的生物素，合成好的是单链。那么在PCR上退火使两条探针形成双链之后是直接使用PCR产物进行下步实验还是对PCR产物进行纯化之后再使用？
2、我使用的试剂盒是Throme的，实验步骤里说要使用6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，请问这个怎么配制？由于没有加入SDS，在电泳的时候要考虑蛋白自身的电荷吗？（如何保证蛋白电泳时的方向）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-10 15:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xy656691(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-16 19:48:58
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
   30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
   5xTBE                 2.4ml
   ddH2O                7.2ml
   10%AP                200ul
   TEMED                10ul
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-16 10:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-16 10:17:19
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
   30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
   5xTBE                 2.4ml
   ddH2O                7.2ml
   10%AP                200ul
   TEMED                10ul

谢谢，探针只有25bp大小，怎么纯化呢？一般的PCR纯化试剂盒只能纯化100bp以上的。
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-16 17:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很好谢谢 2014-07-18 10:49:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-16 17:38:38
谢谢，探针只有25bp大小，怎么纯化呢？一般的PCR纯化试剂盒只能纯化100bp以上的。...

只能用小片段回收试剂盒。一般的回收试剂盒回收不回来。我们用的是QIAEN的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-17 10:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-17 10:16:42
只能用小片段回收试剂盒。一般的回收试剂盒回收不回来。我们用的是QIAEN的。...

你好，我问了qiagen的代理商，他们的纯化试剂盒最小只能回收70bp的。请问你们当时的探针是多少bp？
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-21 09:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-21 09:28:51
你好，我问了qiagen的代理商，他们的纯化试剂盒最小只能回收70bp的。请问你们当时的探针是多少bp？...

40bp。QIAEX II Gel Extraction Kit  从凝胶和溶液中纯化DNA片段（40 bp–50 kb）
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-21 09:36:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-21 09:36:54
40bp。QIAEX II Gel Extraction Kit  从凝胶和溶液中纯化DNA片段（40 bp–50 kb）...

可是我的只有25bp。。。
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-21 09:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-21 09:38:38
可是我的只有25bp。。。...

我建议你不回收，直接跑试试。
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-22 10:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的探针是不是太短了点，为什么不弄得长一点呢，还有直接合成的探针就不用纯化了吧
赞一下 回复此楼
小虫虫~~
9楼2014-07-22 15:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 胡亚梅 at 2014-07-22 15:35:38
你的探针是不是太短了点，为什么不弄得长一点呢，还有直接合成的探针就不用纯化了吧

当时没考虑到回收这一步的问题，就弄的短了。我做了一次没有纯化的。效果还行。
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-24 17:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xy656691 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +5 硕星赴 2026-04-09 5/250 2026-04-09 18:19 by 学术之美
[考研] 269求调剂 +5 跪求收留。 2026-04-04 5/250 2026-04-09 18:16 by Delta2012
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +3 wwwooden 2026-04-08 5/250 2026-04-09 17:05 by 大三不四
[考研] 调剂 +7 只叙离别辞 2026-04-09 9/450 2026-04-09 16:58 by 1753564080
[考研] 复试调剂，一志愿郑州大学材料与化工289分 +31 硕星赴 2026-04-08 31/1550 2026-04-09 16:54 by Delta2012
[考研] 生物学调剂，一志愿西南大学348，Top期刊一区二作、二区三作，三等奖学金三次 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 16:15 by 求调剂zz
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +5 汪某. 2026-04-09 5/250 2026-04-09 15:38 by 蒋皓禹
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +7 超人不会飞@ 2026-04-08 7/350 2026-04-09 09:35 by gong120082
[考研] 327求调剂 +10 Xxjc1107. 2026-04-06 11/550 2026-04-09 01:21 by lature00
[考研] 285求调剂 +20 哦呦呼o 2026-04-04 20/1000 2026-04-08 22:23 by yutian743
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 085602调剂 初试总分335 +3 19123253302 2026-04-06 3/150 2026-04-07 18:00 by jp9609
[考研] 专硕304找调剂，一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 化学357分，考研调剂 +11 .Starry. 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:28 by houyaoxu
[考研] 306分材料与化工求调剂 +7 黎吧啦啦你很有� 2026-04-03 7/350 2026-04-05 17:18 by Hdyxbekcb
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 292求调剂 +11 2022080213 2026-04-04 13/650 2026-04-04 18:38 by macy2011
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭