应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 关于EMSA实验的一些问题
141/2返回列表12下一页
查看: 2529  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xy656691

金虫 (正式写手)

[求助] 关于EMSA实验的一些问题 已有2人参与

1、我合成的探针是在5‘端标记的生物素，合成好的是单链。那么在PCR上退火使两条探针形成双链之后是直接使用PCR产物进行下步实验还是对PCR产物进行纯化之后再使用？
2、我使用的试剂盒是Throme的，实验步骤里说要使用6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，请问这个怎么配制？由于没有加入SDS，在电泳的时候要考虑蛋白自身的电荷吗？（如何保证蛋白电泳时的方向）
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-10 15:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
xy656691(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-16 19:48:58
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
   30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
   5xTBE                 2.4ml
   ddH2O                7.2ml
   10%AP                200ul
   TEMED                10ul
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-16 10:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-16 10:17:19
1.探针需要纯化后再使用。
2.6%非变性胶配方
   30%Acr-Bis(29:1)  2.4ml
   5xTBE                 2.4ml
   ddH2O                7.2ml
   10%AP                200ul
   TEMED                10ul

谢谢，探针只有25bp大小，怎么纯化呢？一般的PCR纯化试剂盒只能纯化100bp以上的。
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-16 17:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 很好谢谢 2014-07-18 10:49:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-16 17:38:38
谢谢，探针只有25bp大小，怎么纯化呢？一般的PCR纯化试剂盒只能纯化100bp以上的。...

只能用小片段回收试剂盒。一般的回收试剂盒回收不回来。我们用的是QIAEN的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-17 10:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-17 10:16:42
只能用小片段回收试剂盒。一般的回收试剂盒回收不回来。我们用的是QIAEN的。...

你好，我问了qiagen的代理商，他们的纯化试剂盒最小只能回收70bp的。请问你们当时的探针是多少bp？
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-21 09:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-21 09:28:51
你好，我问了qiagen的代理商，他们的纯化试剂盒最小只能回收70bp的。请问你们当时的探针是多少bp？...

40bp。QIAEX II Gel Extraction Kit  从凝胶和溶液中纯化DNA片段（40 bp–50 kb）
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-21 09:36:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhouxiaohan at 2014-07-21 09:36:54
40bp。QIAEX II Gel Extraction Kit  从凝胶和溶液中纯化DNA片段（40 bp–50 kb）...

可是我的只有25bp。。。
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-21 09:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaohan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-21 09:38:38
可是我的只有25bp。。。...

我建议你不回收，直接跑试试。
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-22 10:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的探针是不是太短了点，为什么不弄得长一点呢，还有直接合成的探针就不用纯化了吧
赞一下 回复此楼
小虫虫~~
9楼2014-07-22 15:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 胡亚梅 at 2014-07-22 15:35:38
你的探针是不是太短了点，为什么不弄得长一点呢，还有直接合成的探针就不用纯化了吧

当时没考虑到回收这一步的问题，就弄的短了。我做了一次没有纯化的。效果还行。
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-24 17:47:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xy656691 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭