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七小艾

新虫 (小有名气)

[求助] 有关2D电泳样品制备的问题 已有1人参与

各位大神,一不小心悲剧,课题变成了蛋白质组学
要用2D电泳,以前从没学过电泳,现在处于看文献看书阶段,遇到的第一个问题:
样品制备是不是一定要除DNA、RNA?因为书上说DNA、RNA会使IEF胶条酸性端聚焦不良,也可能在银染得胶上产生明显的背景,如果使用考马斯亮蓝染色法,是不是就可以不用除DNA、RNA?我看的一篇文献里没提到处DNA、RNA这一步。
各位大神请帮忙解答一下,感激不尽
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proteomicszj

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-02 10:48:06
七小艾: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-04 15:34:42
尿素、CHAPS: IEF时用到,要求纯度较高。CHAPS稍微贵点,尿素比较便宜。
4楼2014-08-02 09:10:52
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proteomicszj

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
七小艾: 金币+5, 有帮助 2014-07-27 14:50:37
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-08-02 10:47:58
样品制备是不是一定要除DNA、RNA?
当然。样品制备过程中一般包括了去除DNA和RNA,可能没有指出而已。
2楼2014-07-26 12:30:50
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七小艾

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by proteomicszj at 2014-07-26 12:30:50
样品制备是不是一定要除DNA、RNA?
当然。样品制备过程中一般包括了去除DNA和RNA,可能没有指出而已。

多谢,现在看明白了,蛋白经过沉淀已经除去其中的DNA、RNA了。
只是还有个问题,是不是整个2D电泳过程中的所有试剂都要用进口的?包括蛋白沉淀时用到的丙酮、TCA等吗?细胞裂解时用到的裂解液(尿素、CHAPS等)也要用进口的吗?还是只要从水化开始的试剂用进口的就可以?
3楼2014-07-27 14:48:49
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七小艾

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by proteomicszj at 2014-08-02 09:10:52
尿素、CHAPS: IEF时用到,要求纯度较高。CHAPS稍微贵点,尿素比较便宜。

多谢,试剂已经订了,试剂到了就试试
5楼2014-08-04 15:34:22
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