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chenmy2007

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR拖尾现象 已有3人参与

PCR第一次遇到这种情况,捉急中,这个貌似也不是拖尾,三个条带中中间的是阴性对照,居然出现了更亮的条带,用的是TAKaRa的LA Taq,目的条带应该是7.4 Kb,反应条件是94度 5min
   94度 50s
   54度 55s
   72度 8min
   循环35次,终延伸72度15min
求高手帮忙解决,谢谢啊!!

关于PCR拖尾现象
2014-6-18.jpg
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松果花开

银虫 (小有名气)

貌似降解得很厉害

[ 发自小木虫客户端 ]
心怀梦想,肩扛责任,努力就有收获,坚持才能成功
2楼2014-06-18 16:05:44
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yangzwty

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能是缓冲液的浓度或是受非特异性的影响
3楼2014-06-18 16:26:38
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chenmy2007

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 松果花开 at 2014-06-18 16:05:44
貌似降解得很厉害

主要是阴性对照 中间的那个也是这种情况
4楼2014-06-18 16:36:01
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chenmy2007

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yangzwty at 2014-06-18 16:26:38
有可能是缓冲液的浓度或是受非特异性的影响

阴性也是这样,不可能污染了呀
5楼2014-06-18 16:37:04
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chenmy2007

新虫 (初入文坛)

求大神指点呀
6楼2014-06-18 17:26:06
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

咨询下TaKaRa的代理商 代理商会帮你问问有经验的工作人员

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
7楼2014-06-18 23:34:38
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenmy2007: 金币+5 2014-06-24 21:52:56
1、你的阴性对照是用水做的模板吗?如果是,那么阴性对照是不应该有条带的,有条带的话就是污染了
2、模板的好坏会影响你的扩增结果
3、引物的特异性也会影响扩增结果
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
8楼2014-06-19 09:08:48
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chenmy2007

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 青豆同学 at 2014-06-18 23:34:38
咨询下TaKaRa的代理商 代理商会帮你问问有经验的工作人员

咨询了工作人员,可能是水的问题~
9楼2014-06-19 11:01:49
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
10楼2014-06-20 16:14:31
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