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06nancy

铁虫 (小有名气)

[交流] westen blot怎么转都转不上,求助

目标蛋白分子量时14kd和25kd,bio-rad湿转,0.22um的pvdf膜,总蛋白浓度是0.2mg/mL,上样量做过10ul,20ul。湿转条件是200mA,时间分别做过1h,1.5h和2h,但是marker每次都能很好的转到膜上,但是样品用丽春红染色后发现膜上没有蛋白条带。
ps:我在考虑是不是蛋白浓度太低了,水解了?看了一些资料,资料上说一般一个泳道的上样量在30ug-100ug的蛋白量。求大家帮忙看看我这个实验!谢谢
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06nancy

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 毛线线爱科研 at 2014-05-29 20:53:02
分子量在100kDa以下建议用半干转,你湿转的这个条件有可能把你的目标蛋白转过了吧

半干转的仪器还没买回来,目前只能湿转
5楼2014-05-30 08:36:16
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grase

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
06nancy: 金币+1 2014-05-30 08:34:33
小分子量,丽春红可能不好染色。建议做wb检测。染色看也看不准。看不见并不一定转不上。看见的也未必就是你的目的蛋白。上抗体,直接说嘛问题。
2楼2014-05-29 18:16:46
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毛线线爱科研

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子量在100kDa以下建议用半干转,你湿转的这个条件有可能把你的目标蛋白转过了吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-05-29 20:53:02
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06nancy

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by grase at 2014-05-29 18:16:46
小分子量,丽春红可能不好染色。建议做wb检测。染色看也看不准。看不见并不一定转不上。看见的也未必就是你的目的蛋白。上抗体,直接说嘛问题。

一抗比较少,不能浪费,所以一直不敢往下做,想确定转膜成功再上一抗
4楼2014-05-30 08:35:45
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