24小时热门版块排行榜    

查看: 1304  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

06nancy

铁虫 (小有名气)

[交流] westen blot怎么转都转不上,求助

目标蛋白分子量时14kd和25kd,bio-rad湿转,0.22um的pvdf膜,总蛋白浓度是0.2mg/mL,上样量做过10ul,20ul。湿转条件是200mA,时间分别做过1h,1.5h和2h,但是marker每次都能很好的转到膜上,但是样品用丽春红染色后发现膜上没有蛋白条带。
ps:我在考虑是不是蛋白浓度太低了,水解了?看了一些资料,资料上说一般一个泳道的上样量在30ug-100ug的蛋白量。求大家帮忙看看我这个实验!谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

毛线线爱科研

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子量在100kDa以下建议用半干转,你湿转的这个条件有可能把你的目标蛋白转过了吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-05-29 20:53:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

grase

捐助贵宾 (职业作家)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
06nancy: 金币+1 2014-05-30 08:34:33
小分子量,丽春红可能不好染色。建议做wb检测。染色看也看不准。看不见并不一定转不上。看见的也未必就是你的目的蛋白。上抗体,直接说嘛问题。
2楼2014-05-29 18:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

06nancy

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by grase at 2014-05-29 18:16:46
小分子量,丽春红可能不好染色。建议做wb检测。染色看也看不准。看不见并不一定转不上。看见的也未必就是你的目的蛋白。上抗体,直接说嘛问题。

一抗比较少,不能浪费,所以一直不敢往下做,想确定转膜成功再上一抗
4楼2014-05-30 08:35:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

06nancy

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 毛线线爱科研 at 2014-05-29 20:53:02
分子量在100kDa以下建议用半干转,你湿转的这个条件有可能把你的目标蛋白转过了吧

半干转的仪器还没买回来,目前只能湿转
5楼2014-05-30 08:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 0854复试调剂 276 +3 wmm9 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:13 by 热情沙漠
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
请填处理意见