应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR小片段出不来
81/1返回列表
查看: 1634  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

[求助] PCR小片段出不来 已有2人参与

最近新订两对了引物，做PCR，四百多的条带出来了，一百多的条带怎么也出不来，试过梯度的，也没出来，模版和四百多的是一样的，只不过P的片段不一样，理论上很好P的呀，所以纠结了，求指点，谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-10 18:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
泡菜肉丝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-10 22:11:39
可以尝试调节一下退火温度和延伸时间，另外配胶时可以增加琼脂糖浓度试一下。
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2014-05-10 21:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2014-05-10 21:21:03
可以尝试调节一下退火温度和延伸时间，另外配胶时可以增加琼脂糖浓度试一下。

嗯，温度调整过了，没用，其他试试吧，谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-10 21:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mehongyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-01 16:55:36
确定引物序列的准确性了吗？照常理来说100多的不可能出不来，或者是不是胶浓度太低，片段和引物二聚体没有分开。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-13 16:06:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mehongyu at 2014-05-13 16:06:07
确定引物序列的准确性了吗？照常理来说100多的不可能出不来，或者是不是胶浓度太低，片段和引物二聚体没有分开。

嗯，序列没有问题，可是在100bp以下有淡淡的条带，应该是引物二聚体，1%的胶，胶浓度有很大影响吗？一点点都看不到。下次试下2%的看看吧。谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-13 16:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mehongyu at 2014-05-13 16:06:07
确定引物序列的准确性了吗？照常理来说100多的不可能出不来，或者是不是胶浓度太低，片段和引物二聚体没有分开。

你好 ，我又做了一遍，2%的胶检测的，只有二聚体没有目的片段，温度梯度试过了，请问还能怎么改变下条件？
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-14 17:07:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-05-14 17:07:07
你好 ，我又做了一遍，2%的胶检测的，只有二聚体没有目的片段，温度梯度试过了，请问还能怎么改变下条件？...

目的片段的GC含量怎样？用GC buffer扩过了吗？

实在没办法，只能尝试巢式PCR了。
赞一下 回复此楼
7楼2014-05-14 18:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-05-14 18:16:08
目的片段的GC含量怎样？用GC buffer扩过了吗？

实在没办法，只能尝试巢式PCR了。...

GC含量是43%，没用过这个buffer，试一下吧，谢谢呵呵
赞一下 回复此楼
8楼2014-05-14 22:04:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 泡菜肉丝 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 332求调剂 +5 Zz版 2026-03-13 5/250 2026-03-17 11:01 by JineShine
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 5/250 2026-03-17 06:56 by Muziwl
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 085601求调剂 +3 Du.11 2026-03-16 3/150 2026-03-16 20:42 by 无际的草原
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭