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细胞RNA提取一直失败 ，什么原因？已有3人参与
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新手，提取细胞RNA，连续几次都失败，不知问题出在哪里？ 具体步骤如下： 1） 6孔板，细胞汇合至90-100%，每孔加入1000ul trizol，反复吹打，使细胞溶解，室温静置5min。 2）将细胞的trizol裂解液转移至一1.5mlEP管中，加入200ul的氯仿/1000ul trizol，用手剧烈振摇15s，室温静置2－3min，4度 12000 转/分，离心15min。 3）吸取400ul上清转移至新的EP管中，加入500ul的异丙醇/1000ul trizol，上下摇晃3次，室温放置10min，4度 12000 转/分离心10min。 4）弃去上清（分别用大小枪头吸取），沉淀用1ml75％DEPC配制的乙醇溶液洗涤，4度 7500转/分 离心5min， 弃去乙醇溶液，加入20ul 0.1%的DEPC水溶解。 按上述步骤， 连续几次提取时在加入异丙醇离心后都看不到沉淀，用75％乙醇洗涤后才见很小很小的白色沉淀，最终溶解后检测OD260/OD280基本都在1.6-1.7，电泳跑胶30分钟，只有加孔样孔发亮，或者加样孔下有很短的弥散。已经做了几次了，都是如此，不知道什么原因，请高手指点。 |
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gyesang
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