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心月之星

新虫 (初入文坛)

[求助] CTAB法提取植物DNA 已有5人参与

用CTAB法提取植物DNA ,用异丙醇沉淀后总是没有絮状沉淀出现,请问一下大家是什么原因?
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周大神

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gutong1117 at 2014-05-07 11:28:59
原因太多了,希望楼主能够说的详细一点。异丙醇沉淀没有东西90%是因为前面的提取过程中不小心丢失了,因为总DNA的量其实是非常大的,不会出现RNA提取的时候沉淀不下来的状况,而且虽然我们说前面有些步骤不要太剧烈 ...

大神级的人物啊,领教!很有道理!
面对阳光,努力生长
10楼2014-05-10 22:53:37
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棉花糖甜

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:14
本帖内容被屏蔽

2楼2014-05-07 10:25:55
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gutong1117

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
心月之星(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:25
原因太多了,希望楼主能够说的详细一点。异丙醇沉淀没有东西90%是因为前面的提取过程中不小心丢失了,因为总DNA的量其实是非常大的,不会出现RNA提取的时候沉淀不下来的状况,而且虽然我们说前面有些步骤不要太剧烈,但是那主要还是怕使DNA断裂对后续实验造成影响,对抽提本身影响没那么大。
最大的可能性有几种
1.材料选取的新不新鲜,研磨的充分不充分,液氮研磨之后有没有及时加入裂解缓冲液(研磨和裂解这部非常关键,80%的时候做不出来没东西都是这一步没做好)
2.选取材料DNA酶是不是很多,如果多的话,研磨解冻之前加入的裂解缓冲液中,螯合剂等抑制酶活性的物质的量应该提高。
3.CTAB等需要预热的物质,有没有预热好,需要保持温度的步骤温度是不是够
4.酚仿异戊醇抽提次数是不是太多,除蛋白的时候收集的上清量是不是太少
5.实验流程是不是太长,或者某些步骤混匀的太过激烈
3楼2014-05-07 11:28:59
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:37
没有絮状沉淀未必是坏事,离心下来,加水溶解了跑个电泳看看

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-05-07 12:07:15
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