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CTAB法提取植物DNA已有5人参与
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| 用CTAB法提取植物DNA ,用异丙醇沉淀后总是没有絮状沉淀出现，请问一下大家是什么原因？ |
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【答案】应助回帖
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心月之星(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:25
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心月之星(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:25
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原因太多了，希望楼主能够说的详细一点。异丙醇沉淀没有东西90%是因为前面的提取过程中不小心丢失了，因为总DNA的量其实是非常大的，不会出现RNA提取的时候沉淀不下来的状况，而且虽然我们说前面有些步骤不要太剧烈，但是那主要还是怕使DNA断裂对后续实验造成影响，对抽提本身影响没那么大。 最大的可能性有几种 1.材料选取的新不新鲜，研磨的充分不充分，液氮研磨之后有没有及时加入裂解缓冲液（研磨和裂解这部非常关键，80%的时候做不出来没东西都是这一步没做好） 2.选取材料DNA酶是不是很多，如果多的话，研磨解冻之前加入的裂解缓冲液中，螯合剂等抑制酶活性的物质的量应该提高。 3.CTAB等需要预热的物质，有没有预热好，需要保持温度的步骤温度是不是够 4.酚仿异戊醇抽提次数是不是太多，除蛋白的时候收集的上清量是不是太少 5.实验流程是不是太长，或者某些步骤混匀的太过激烈 |
3楼2014-05-07 11:28:59
7楼2014-05-07 15:12:22
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9楼2014-05-07 19:19:11
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2楼2014-05-07 10:25:55
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异丙醇必须在-20℃下预冷，然后加完放冰箱-20℃ 20min以上 ， 你这么做下试试吧， 肯定能行8楼2014-05-07 19:17:59
10楼2014-05-10 22:53:37