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zotingting

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2610.5
帖子: 7
在线: 3.9小时
虫号: 2386568
注册: 2013-03-29
性别: MM
专业: 植物病理学

[求助] 关于16sr dna 细菌鉴定已有1人参与

是一步一步按照步骤来做的，可是试了八九次，无论是用PMD-18.19 或者T载体，用的trans 5α或者是别的，没有用蓝白斑筛选，但是最后用m13F和M13r进行鉴定pcr,可是一直都跑不出目标条带（1700Bp左右），求助啊，到底哪里可能出现问题。

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1楼 2014-05-06 09:53:44

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xiangchou812

木虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 3783.4
帖子: 96
在线: 66.4小时
虫号: 73882
注册: 2005-06-10
性别: GG
专业: 微生物生态学

IPTG和X-Gal又不贵，为什么就不做呢？不做无形中会增加很多工作量，费时费力费钱！看你写了这么多，其实问题就是没连到克隆载体上。建议改一下目的片段与克隆载体的连接比例，2:1或3:1试一下，另外关键一点看你用的什么酶，高保真酶有3'到5'外切酶活性，会产生平头末端，需要加A后再进行TA克隆。祝你好运！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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