应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 关于16sr dna 细菌鉴定
61/1返回列表
查看: 1495  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zotingting

金虫 (初入文坛)

[求助] 关于16sr dna 细菌鉴定 已有1人参与

是一步一步按照步骤来做的，可是试了八九次，无论是用PMD-18.19 或者T载体，用的trans 5α或者是别的，没有用蓝白斑筛选，但是最后用m13F和M13r进行鉴定pcr,可是一直都跑不出目标条带（1700Bp左右），求助啊，到底哪里可能出现问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-06 09:53:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2014-05-06 11:23:49
zotingting: 金币+10, ★有帮助 2014-05-07 18:29:58
1.片段浓度太低，没连上，扩好16S至少回收100微升
2.体系里有些东西过期了？
3.换东西不一定好，别人能做出来，你做不出来，那就是自己操作的问题
4.换个人做
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-06 10:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zotingting

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2014-05-06 10:27:59
1.片段浓度太低，没连上，扩好16S至少回收100微升
2.体系里有些东西过期了？
3.换东西不一定好，别人能做出来，你做不出来，那就是自己操作的问题
4.换个人做

第三和第四，第三是同时实验室还有别人在弄，那个人也跑不出来。
第四，已经试过让师兄和实验室另一个老师做，可是也一样没有
第二，链接转化的试剂是新买的，切胶回收的试剂盒也是
第一，切胶回收之后跑的条带还是挺亮的。

求助啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-07 10:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神
引用回帖:
3楼: Originally posted by zotingting at 2014-05-07 10:43:47
第三和第四，第三是同时实验室还有别人在弄，那个人也跑不出来。
第四，已经试过让师兄和实验室另一个老师做，可是也一样没有
第二，链接转化的试剂是新买的，切胶回收的试剂盒也是
第一，切胶回收之后跑的条带 ...

1.你的问题：跑不出目的条带？1700BP左右？16S全长才1500多点。
2.切胶回收后上样1微升很亮么？
3.增大连接体系体积，原来10μ，提到20μ，PMD19载体有可以用氨苄筛蓝白的，你就用呗，
建议把你的样品质量从头到尾给师兄或者老师过一遍，有时候你认为没问题的，师兄他们只是帮你做一下转化么，也许你模板质量不过关~
要么就是载体太挫了，自连了
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-07 12:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zotingting

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dllchina at 2014-05-07 12:19:35
1.你的问题：跑不出目的条带？1700BP左右？16S全长才1500多点。
2.切胶回收后上样1微升很亮么？
3.增大连接体系体积，原来10μ，提到20μ，PMD19载体有可以用氨苄筛蓝白的，你就用呗，
建议把你的样品质量从头到 ...

1.第一次对扩增的DNA 跑出的条带大概是在1700bp这样的位置额。
2，切胶回收之后，结合6x loadingbuffer 进行跑胶，老师和师兄都看过，说挺亮的。
3. 没试过增大连接体系体积，不过倒可以试试，只是那个蓝白斑筛选我们实验室不做，直接最后用m13f和m13r引物进行扩增进行鉴定pcr。
好的，我试试全程让老师过一次吧，灰常感谢啦~
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-07 18:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangchou812

木虫 (小有名气)
IPTG和X-Gal又不贵，为什么就不做呢？不做无形中会增加很多工作量，费时费力费钱！看你写了这么多，其实问题就是没连到克隆载体上。建议改一下目的片段与克隆载体的连接比例，2:1或3:1试一下，另外关键一点看你用的什么酶，高保真酶有3'到5'外切酶活性，会产生平头末端，需要加A后再进行TA克隆。祝你好运！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-10 07:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zotingting 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-18 11:28 by HjTo14L7GlnE
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-18 10:28 by yS4CkeWDhD6V
[有机交流] 各位大神，目前国内有哪些比较好用的逆合成软件？ 20+3 zapen 2026-09-15 8/400 2026-09-18 10:14 by tianliang0414
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-18 09:18 by yS4CkeWDhD6V
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:04 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:16 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-18 01:54 by cITaGg3p5edr
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-18 01:40 by cITaGg3p5edr
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 15:29 by 0ngsZVSCTS7z
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 23jxep3nCNZb 2026-09-14 6/300 2026-09-17 13:27 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 yaCh4X3wd045 2026-09-14 4/200 2026-09-17 13:17 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-17 03:16 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:26 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-16 14:36 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:36 by LH5NkK5Ud4bh
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭