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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 上下游引物退火温度相差十几度，PCR的退火该怎么设置呢？
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 上下游引物退火温度相差十几度，PCR的退火该怎么设置呢？ 已有4人参与

各位大虾：我的上下游引物退火温度相差有十几度，那我的PCR的退火该根据谁来设呢？
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越努力越幸运
1楼 2014-04-28 15:28:12
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+1 2014-04-29 18:52:35
应该是按照温度高的那个设定的吧。我之前是这样做的
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2楼2014-04-28 17:01:46
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 青苹果QT at 2014-04-28 17:01:46
应该是按照温度高的那个设定的吧。我之前是这样做的

就直接是用高的那个减去5度左右吗？
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越努力越幸运
3楼2014-04-28 17:08:04
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-28 19:49:22
用靠近低退火温度的引物的tm值容易出结果

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-04-28 18:58:09
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-28 18:58:09
用靠近低退火温度的引物的tm值容易出结果

您和楼上说的刚好相反，请问您是自己这么做过吗？
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越努力越幸运
5楼2014-04-28 22:08:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-28 22:08:36
您和楼上说的刚好相反，请问您是自己这么做过吗？...

你自己试试不就知道了？

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-04-28 22:24:12
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-29 18:52:26
1. 如果有可能的话，最好重新设计引物
2. 如果只能用这对引物的话，一般按照Tm较低的引物来算
3. 如果没有的到特异性扩增的话，最好用梯度PCR，设置梯度Tm值试一下
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7楼2014-04-28 23:42:59
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青苹果QT

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-28 17:08:04
就直接是用高的那个减去5度左右吗？...

我一般退火温度是在55-60度之间
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8楼2014-04-29 07:44:20
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+1 2014-04-29 18:52:18
本帖内容被屏蔽
9楼2014-04-29 09:02:43
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)
设置梯度嘛，2度一个梯度。
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10楼2014-07-31 09:57:23
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