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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 上下游引物退火温度相差十几度,PCR的退火该怎么设置呢? 已有4人参与

各位大虾:我的上下游引物退火温度相差有十几度,那我的PCR的退火该根据谁来设呢?
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越努力越幸运
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+1 2014-04-29 18:52:35
应该是按照温度高的那个设定的吧。我之前是这样做的
2楼2014-04-28 17:01:46
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 青苹果QT at 2014-04-28 17:01:46
应该是按照温度高的那个设定的吧。我之前是这样做的

就直接是用高的那个减去5度左右吗?
越努力越幸运
3楼2014-04-28 17:08:04
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-28 19:49:22
用靠近低退火温度的引物的tm值容易出结果

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-28 18:58:09
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-28 18:58:09
用靠近低退火温度的引物的tm值容易出结果

您和楼上说的刚好相反,请问您是自己这么做过吗?
越努力越幸运
5楼2014-04-28 22:08:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-28 22:08:36
您和楼上说的刚好相反,请问您是自己这么做过吗?...

你自己试试不就知道了?

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-04-28 22:24:12
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-29 18:52:26
1. 如果有可能的话,最好重新设计引物
2. 如果只能用这对引物的话,一般按照Tm较低的引物来算
3. 如果没有的到特异性扩增的话,最好用梯度PCR,设置梯度Tm值试一下
7楼2014-04-28 23:42:59
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-28 17:08:04
就直接是用高的那个减去5度左右吗?...

我一般退火温度是在55-60度之间
8楼2014-04-29 07:44:20
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bolysu

禁虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+1 2014-04-29 18:52:18
本帖内容被屏蔽

9楼2014-04-29 09:02:43
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)

设置梯度嘛,2度一个梯度。
10楼2014-07-31 09:57:23
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