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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA不溶解怎么办？
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fenheyue

银虫 (小有名气)

[求助] DNA不溶解怎么办？ 已有9人参与

各位大侠好，半个月前我收到国外寄过来的DNA样品，是用乙酸钠和乙醇沉淀的。我离心后放在通风厨里晾干了2个小时，然后用dd水溶解，可是都融了半个月了，还有很多DNA没有溶解，我该怎么办呢？？？我曾试过53°加热促进溶解，但是基本上没有效果。
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做一个有主见的人！
1楼 2014-04-22 15:44:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

吃过藕粉没？
或者你试过把agarose粉末加到热水，或者已经煮化的胶里面么？
这种agarose，哪怕你煮上七七四十九天，也不见得溶解
这就是为什么过干的核酸不利于溶解的一个类似现象
核酸作为多聚物，你让它干透了，再加水，外面的一层溶解了，但是作为多聚物，又离不开那一团，不离开，里面的又接触不到水，何谈溶解？
agarose粉末直接到热水，外面的一层很快溶解糊化，形成一层防水层，里面的再也接触不到水了
而在冷水里面，水还有时间渗透到颗粒里面的，这样就可以都溶解了。

所以你这个情况提高盐浓度估计难以奏效。

我建议你加点碱试试，把NaOH的终浓度加到8 mM，8 mM的NaOH pH~9，不影响DNA的稳定性。溶解之后也很容易用Tris或者HEPES buffer调回来。
碱性环境有利于DNA溶解，相当于提高了溶解度。

另外，很有效的一个方法，物理破坏，你用枪头去戳那段沉淀，尽量把它搞小，增加接触面积。
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18楼2014-04-25 18:08:36
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盛身绽放

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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fenheyue(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-23 12:05:48
你的buffer是pH 7.0的？
大分子量的DNA肯定溶解的慢甚至不溶
一般pH 8左右的buffer溶DNA比较好                  
不知道是不是你的缓冲液有问题，用水，trs-hcl缓冲液，都是可以溶解的 ，放在四度冰箱里，过夜。就可以了。 如果你的还没有溶，就多放几天吧。 1mg/ml，浓度没有问题的。
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活的漂亮是本事
2楼2014-04-22 20:04:11
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fenheyue(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-23 12:05:56
一般就是用dd水或者是TE溶解，不太理解半个月都溶解不了。如果样品太多，可以多加水或者是TE，溶解后再浓缩下。
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4楼2014-04-23 00:40:23
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飘落Oo天气

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-04-23 23:52:47
用枪头反复缓慢的吹打，我们也是乙醇沉淀用DD水溶解的。
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5楼2014-04-23 04:43:57
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普通回帖

fenheyue

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 盛身绽放 at 2014-04-22 20:04:11
你的buffer是pH 7.0的？
大分子量的DNA肯定溶解的慢甚至不溶
一般pH 8左右的buffer溶DNA比较好                  
不知道是不是你的缓冲液有问题，用水，trs-hcl缓冲液，都是可以溶解的 ，放在四度冰箱里，过夜 ...

我是直接用dd水溶的。我在网上搜了一下说是overdry了，不知道有没有什么办法啊？
我今天配了2mol/L的NaCl加进去了也没有效果。。。。
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做一个有主见的人！
3楼2014-04-22 20:33:14
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a409869942

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-04-23 23:52:55
一般dd水就行，不行的话就用0.1M的TEAA，
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6楼2014-04-23 13:26:03
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盛身绽放

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 盛身绽放 at 2014-04-22 20:04:11
你的buffer是pH 7.0的？
大分子量的DNA肯定溶解的慢甚至不溶
一般pH 8左右的buffer溶DNA比较好                  
不知道是不是你的缓冲液有问题，用水，trs-hcl缓冲液，都是可以溶解的 ，放在四度冰箱里，过夜 ...

最后的可能就是DNA的纯度有问题

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活的漂亮是本事
7楼2014-04-23 15:54:31
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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fenheyue(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-24 17:48:36
一般是两个问题，一个就是你说的overdry，吹太干就没办法了，再弄也不会完全溶。不过会有一部分溶，你要做PCR是没问题的。
另一个可能是抽提不太彻底，记得苯酚氯仿抽提的时候多摇一摇。
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fenheyue
8楼2014-04-24 11:04:00
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灿烂的阳光5
9楼2014-04-24 11:27:44
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Neo2000

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-04-24 17:48:54
你那个是基因组DNA吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2014-04-24 11:48:43
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