应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA不溶解怎么办？
192/2返回列表上一页12
查看: 8942  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fenheyue

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-24 11:48:43
你那个是基因组DNA吗？

是的啊，有什么好办法么
赞一下 回复此楼
做一个有主见的人！
11楼2014-04-24 20:02:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
11楼: Originally posted by fenheyue at 2014-04-24 20:02:19
是的啊，有什么好办法么...

1M NaCl,1x TE,溶解一周，试试

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
12楼2014-04-24 20:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fenheyue

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-24 20:24:28
1M NaCl,1x TE,溶解一周，试试
...

我昨天试了2M NaCl 都不溶。。。TE也试过了，也是不溶。。。我准备放弃了
赞一下 回复此楼
做一个有主见的人！
13楼2014-04-24 20:44:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨日的晴天
14楼2014-04-24 20:48:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
常规TE缓冲液试试，可50-60度助融
赞一下 回复此楼
只有不断地失败才会成功
15楼2014-04-24 21:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mage123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前买过一次絮状的DNA，也是超难溶的，每次只能取一点点，然后用玻璃棒边碾边溶，基本上就能溶了。之后再买的时候就买粉末状的了，基本上搅一搅就溶了。加油
赞一下 回复此楼
16楼2014-04-24 22:24:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by fenheyue at 2014-04-24 20:44:04
我昨天试了2M NaCl 都不溶。。。TE也试过了，也是不溶。。。我准备放弃了...

实在不行，试试用DNA提取buffer

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
17楼2014-04-24 22:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

吃过藕粉没？
或者你试过把agarose粉末加到热水，或者已经煮化的胶里面么？
这种agarose，哪怕你煮上七七四十九天，也不见得溶解
这就是为什么过干的核酸不利于溶解的一个类似现象
核酸作为多聚物，你让它干透了，再加水，外面的一层溶解了，但是作为多聚物，又离不开那一团，不离开，里面的又接触不到水，何谈溶解？
agarose粉末直接到热水，外面的一层很快溶解糊化，形成一层防水层，里面的再也接触不到水了
而在冷水里面，水还有时间渗透到颗粒里面的，这样就可以都溶解了。

所以你这个情况提高盐浓度估计难以奏效。

我建议你加点碱试试，把NaOH的终浓度加到8 mM，8 mM的NaOH pH~9，不影响DNA的稳定性。溶解之后也很容易用Tris或者HEPES buffer调回来。
碱性环境有利于DNA溶解，相当于提高了溶解度。

另外，很有效的一个方法，物理破坏，你用枪头去戳那段沉淀，尽量把它搞小，增加接触面积。
赞一下(2人) 回复此楼
18楼2014-04-25 18:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fenheyue

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by hutil1543 at 2014-04-24 11:04:00
一般是两个问题，一个就是你说的overdry，吹太干就没办法了，再弄也不会完全溶。不过会有一部分溶，你要做PCR是没问题的。
另一个可能是抽提不太彻底，记得苯酚氯仿抽提的时候多摇一摇。

谢谢！
回复此楼
做一个有主见的人！
19楼2014-04-26 09:47:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fenheyue 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭