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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA提取后电泳，无条带
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WSXP1104

新虫 (小有名气)

[求助] DNA提取后电泳，无条带已有7人参与

微生物基因组大概20-23KB。1%琼脂糖凝胶电泳，100v，30min。Marker有条带，样品、空白、阴性对照都没有条带。
初学者，求指点。
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1楼2014-04-15 20:18:40
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-15 20:37:31
你用什么方法提的？

试剂盒，提取肉中微生物的基因组
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4楼2014-04-15 23:20:22
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-16 06:09:03
你那是不是量太少了看不到
...

Goldview核酸染料，说明书上说可以检测到50ng级DNA或RNA片段。
胶浓度没有问题？
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6楼2014-04-16 08:14:39
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-16 08:21:21
你是分离了微生物提的还是直接连肉一起提？
...

无菌操作称取10.0g碎肉样（其余留作备份,-80℃保存）于盛有90mL生理盐水的锥形瓶中，摇床振摇15min（280rpm,4℃）。取30mL于一灭菌离心管中，300×g（4℃）离心5min。取10mL上清于另一灭菌离心管中，12000×g（4℃）离心10min. 尽可能吸弃上清，离心所得沉淀，采用EasyPure® Genomic DNA Kit试剂盒提取。
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8楼2014-04-16 08:36:36
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-16 08:39:10
那肯定看不到嘛，直接PCR算了，量太少太少
...

后面是PCR、高通量测序，研究微生物的多样性。这样也可以？？
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11楼2014-04-16 09:01:34
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by zhangwei976 at 2014-04-16 08:43:49
两种情况： 1. 没提出来；2. 提取的量太少了。。。所以a加大提取量，b使用阳性菌体提取做对照，确定方法没问题

有必要做紫外看它的浓度吗？？？
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12楼2014-04-16 09:03:05
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-15 21:29:16
会不会胶浓度大了，换0.6%的胶跑一次看看，我之前也是，跑1%胶没跑出来，换了0.6%的胶就跑出来了。。。

0.6%的试了一下，还是没有？
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13楼2014-04-17 08:34:51
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-17 13:32:06
是不是没提出来啊？什么方法提的？
...

试剂盒提的
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15楼2014-04-17 14:25:50
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-17 18:10:56
那应该没问题啊，要不然就重新提一下看看，我最近提的是自己配溶液提的，SDS-CTAB法。。。
...

你提的是什么的DNA？
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17楼2014-04-22 09:51:31
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-22 10:57:23
细菌的，阴性菌。。。...

微生物多样性
细菌，真菌。
但是我看到不少文献都是用细菌DNA试剂盒提取，大标题又是研究什么中微生物多样性。
虽然肉中大多数是细菌，但是也不可以用细菌试剂盒提取的DNA研究微生物多样性呀？
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19楼2014-04-22 14:13:57
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