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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA提取后电泳，无条带
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WSXP1104

新虫 (小有名气)

[求助] DNA提取后电泳，无条带已有7人参与

微生物基因组大概20-23KB。1%琼脂糖凝胶电泳，100v，30min。Marker有条带，样品、空白、阴性对照都没有条带。
初学者，求指点。
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1楼2014-04-15 20:18:40
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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WSXP1104: 金币+1 2014-04-16 09:19:43
你用什么方法提的？

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2楼2014-04-15 20:37:31
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
WSXP1104(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-16 19:31:55
会不会胶浓度大了，换0.6%的胶跑一次看看，我之前也是，跑1%胶没跑出来，换了0.6%的胶就跑出来了。。。
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Someone
3楼2014-04-15 21:29:16
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-15 20:37:31
你用什么方法提的？

试剂盒，提取肉中微生物的基因组
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4楼2014-04-15 23:20:22
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by WSXP1104 at 2014-04-15 23:20:22
试剂盒，提取肉中微生物的基因组...

你那是不是量太少了看不到

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5楼2014-04-16 06:09:03
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-16 06:09:03
你那是不是量太少了看不到
...

Goldview核酸染料，说明书上说可以检测到50ng级DNA或RNA片段。
胶浓度没有问题？
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6楼2014-04-16 08:14:39
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by WSXP1104 at 2014-04-16 08:14:39
Goldview核酸染料，说明书上说可以检测到50ng级DNA或RNA片段。
胶浓度没有问题？...

你是分离了微生物提的还是直接连肉一起提？

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7楼2014-04-16 08:21:21
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WSXP1104

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-16 08:21:21
你是分离了微生物提的还是直接连肉一起提？
...

无菌操作称取10.0g碎肉样（其余留作备份,-80℃保存）于盛有90mL生理盐水的锥形瓶中，摇床振摇15min（280rpm,4℃）。取30mL于一灭菌离心管中，300×g（4℃）离心5min。取10mL上清于另一灭菌离心管中，12000×g（4℃）离心10min. 尽可能吸弃上清，离心所得沉淀，采用EasyPure® Genomic DNA Kit试剂盒提取。
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8楼2014-04-16 08:36:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by WSXP1104 at 2014-04-16 08:36:36
无菌操作称取10.0g碎肉样（其余留作备份,-80℃保存）于盛有90mL生理盐水的锥形瓶中，摇床振摇15min（280rpm,4℃）。取30mL于一灭菌离心管中，300×g（4℃）离心5min。取10mL上清于另一灭菌离心管中，12000×g（4℃ ...

那肯定看不到嘛，直接PCR算了，量太少太少

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9楼2014-04-16 08:39:10
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
WSXP1104(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-16 19:32:11
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10楼2014-04-16 08:43:49
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