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314243568银虫 (小有名气)
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真菌基因敲出抗生素假阳性问题！
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细菌，比如大肠杆菌，解淀粉芽孢杆菌等基因敲出很容易，而且用Amp等抗生素筛选标记出现的假阳性比例相当低。 但是，对于真菌来说，这个就是一个头疼的问题，比如烟曲霉，黑曲霉等菌株，用潮霉素做筛选标记，正常情况下无标记的菌株是不能在含有抗生素的平板上生长的，抗性标记的质粒线性化后电转原生质体后涂板筛选，按道理长出来应该基本上都是成功整合上基因组（不管整合正确与否）， 问题就在于此，这一群筛选出来的转化子重新转接到含有潮霉素抗性的平板上基本上都能够很好的生长（有对照，对照不长），这也就证明了其导入了潮霉素抗性基因，但是PCR验证结果显示全部error，基因组中无潮霉素基因片段。 这一情况我一直想不通，难道和潮霉素抗性机理相关？但是在黑曲霉中，我们也用了营养缺陷型菌株，结果相同。不知道同行们有什么能够建议的，还望不吝赐教！ |
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5楼2015-05-20 20:02:35