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majichui

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于质粒电泳smear的问题 已有1人参与

构建的克隆菌,用QIAGEN Hispeed Plasmid midi kit(大约两年前购买的)抽提,抽提后取10ug,用Xbal1 酶切过夜,电泳鉴定。质粒为PUC19插入1000bp片段,用1%琼脂糖胶电泳,上样量为100ng,TAE做缓冲液100V电泳70分钟,Marker从大到小是4500、3000、2250、1500、1000。染色用的是SYBR-GREEN染料,成像时用紫外激发(没有400nm的条件)。
泳道1和3是抽提的质粒;2和4是单酶切后,用天根试剂盒(DNA纯化回收试剂盒)纯化后产物。请问条带模糊的原因?
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成功源于想像

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


majichui(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-18 22:32:49
个人觉得上样量偏大,导致拍照不清晰,整体结果是OK的!
2楼2014-05-18 20:37:05
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