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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

[求助] 考马斯亮蓝G250测蛋白浓度问题 已有2人参与

首先是我的实验方法:

考马斯亮蓝配制:称取考马斯亮蓝G-250 100 mg溶于50 mL95%的乙醇中,然后加入85%的磷酸100 mL,用蒸馏水定容至1L。
检测:待测液40UL+考马斯亮蓝溶液200UL,5分钟后 595nm下测吸光值。

实验中出现的问题:

1 我配出来的考马斯亮蓝是青绿色的,而参考资料上说是棕红色的。
2 我用BSA做标曲时发现线性范围(R2>0.99)只限于25ug/ml-100ug/ml (是指加入的40UL的蛋白浓度)。这个范围是不是过于小了啊?是因为我配的考马斯亮蓝溶液有问题导致的吗?特别是蛋白浓度在25ug/ml以下时的吸光值和空白基本是一样的!
3 检测的时候发现反应液中出现蓝色的颗粒物。之后形成絮状沉淀沉于底部。我的考马斯亮蓝溶液是现配的,应该不是变质的问题。

求解决以上问题。

求各位有经验的大神帮帮小弟,小弟在这里先谢谢了!!!
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samson123

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1 我配出来的考马斯亮蓝G250染色剂是也青绿色的;
2 我是按照药典做的,线性0-100ug,相关系数能到995
3 我是把考马斯亮蓝G250进行过滤后再进行试验,没有出现颗粒沉淀,没过滤的就会有出现颗粒。
4楼2019-11-15 09:12:13
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vs570588

木虫 (正式写手)

和你遇到的问题几乎一样,决定不用考马斯亮蓝了,
2楼2014-04-02 23:33:14
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lyz1991422

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
拉风蜗牛王: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢,我试着换个考马斯看看! 2014-04-06 10:51:49
我碰见过你的第一个问题,换水换乙醇换磷酸,怎么配都是青绿色,后来重新买的进口的考马斯,一切ok。
3楼2014-04-04 13:40:02
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