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考马斯亮蓝G250测蛋白浓度问题 已有2人参与
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首先是我的实验方法： 考马斯亮蓝配制：称取考马斯亮蓝G-250 100 mg溶于50 mL95%的乙醇中，然后加入85%的磷酸100 mL，用蒸馏水定容至1L。 检测：待测液40UL+考马斯亮蓝溶液200UL，5分钟后 595nm下测吸光值。 实验中出现的问题： 1 我配出来的考马斯亮蓝是青绿色的，而参考资料上说是棕红色的。 2 我用BSA做标曲时发现线性范围（R2>0.99）只限于25ug/ml-100ug/ml (是指加入的40UL的蛋白浓度)。这个范围是不是过于小了啊？是因为我配的考马斯亮蓝溶液有问题导致的吗？特别是蛋白浓度在25ug/ml以下时的吸光值和空白基本是一样的！ 3 检测的时候发现反应液中出现蓝色的颗粒物。之后形成絮状沉淀沉于底部。我的考马斯亮蓝溶液是现配的，应该不是变质的问题。 求解决以上问题。 求各位有经验的大神帮帮小弟，小弟在这里先谢谢了！！！ |
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