应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 可以往一个细胞内转染两次吗
101/1返回列表
查看: 6527  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nanshi304

新虫 (初入文坛)

[求助] 可以往一个细胞内转染两次吗 已有1人参与

不知道可 不可以先转进一个基因让细胞过表达，然而再转siRNA干扰另一个蛋白，可不可以，如果可以，是同时转进去还是第一个质粒转进去后多少个小时再转干扰RNA?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-31 11:13:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nanshi304(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-31 12:44:42
这个可以的
如果是用Lipofectamine 2000，可以先转siRNA，等24h后再转表达蛋白的质粒
一般siRNA可以72h，蛋白48h足够了，这样时间比较好
而且siRNA转染细胞要求密度不太高，这样长得第二天正好转表达蛋白质质粒
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-03-31 11:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nanshi304

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 11:58:30
这个可以的
如果是用Lipofectamine 2000，可以先转siRNA，等24h后再转表达蛋白的质粒
一般siRNA可以72h，蛋白48h足够了，这样时间比较好
而且siRNA转染细胞要求密度不太高，这样长得第二天正好转表达蛋白质质粒

我还以为6h就可以了，那说明书上说的转染4-6h是说的转染进去还没表达吗？一般质粒转进细胞多久后开始表达啊，还有siRNA要多久发挥干扰效应啊？往一个细胞转染两次会不会对细胞有毒害作用啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-02 22:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-03 19:23:48
nanshi304: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-04 21:04:58
各种纠结。。。
转质粒一般默认48h，转siRNA一般默认72h
这里考虑的更多的并不是质粒DNA和siRNA的稳定性，这两个玩意稳定着呢，一周没问题。
考虑的是最大效率化，lippo转质粒，细胞密度要求90%，转siRNA，细胞密度低一点，所以这么长时间是一盘细胞的生长极限。你再养，细胞死了。
你要两次转染，转染肯定有细胞毒性，耐受性不好的细胞可能转一次就活得不咋地了，这个是你需要提前优化的。
这只是默认，尤其是siRNA。
经常看见有报道，按照默认的72h检测siRNA效果，结果发现定了一堆siRNA，效果都不好，最后发现原来是48h或者24h效果最好，原因不明。
所以如果你的这条siRNA没有做过预实验，先不要搞这么复杂的
转几个小dish，收一个时间梯度，看看什么时候效果最好。
把这些预实验条件先摸好了，再来转两次。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-04-03 09:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了
你说的4-6h
理论上应该是“Lippo-核酸”这个liposome的稳定最长时间
意思就是说，过了这个时间，这个liposome可能就不存在了，可以换液了，尤其是对lippo有毒性的时候，早换液早好。
你可以看见，说明书上说把lippo和DNA/RNA混好之后，说要放20min，然后还加了一句，这玩意可以稳定至少6h。
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-03 09:28:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nanshi304

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-03 09:25:13
各种纠结。。。
转质粒一般默认48h，转siRNA一般默认72h
这里考虑的更多的并不是质粒DNA和siRNA的稳定性，这两个玩意稳定着呢，一周没问题。
考虑的是最大效率化，lippo转质粒，细胞密度要求90%，转siRNA，细胞密 ...

太谢谢你了，高手一个诶，谢谢你的热心帮助！小生还有个问题，就是转染质粒为48h后检测效果挺好的，如果我还要对细胞加药处理12h，那我是在转染48h加药还是在转染36h后加药啊。不知道我有没有说清楚
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-04 21:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hehelmd

木虫 (小有名气)
过表达质粒有的24小时表达已经很好了。如果效率高，转染后长满你完全可以在分一次细胞，然后再进行下一次转染
赞一下 回复此楼
一直向上
7楼2014-04-09 01:22:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwkuaile

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nanshi304 at 2014-04-04 21:09:05
太谢谢你了，高手一个诶，谢谢你的热心帮助！小生还有个问题，就是转染质粒为48h后检测效果挺好的，如果我还要对细胞加药处理12h，那我是在转染48h加药还是在转染36h后加药啊。不知道我有没有说清楚...

我也想问
回复此楼
8楼2014-04-17 16:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dealer

铜虫 (初入文坛)
可以的，同学用英格恩生物的转染试剂，好像可以共转，但是肯定没有分着转的效果好，可以申请试用装具体试试效果如何
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-04-14 10:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
细胞转染，两次应该可行的，但是没做过啊。。。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-08-19 10:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nanshi304 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +4 泠潍1111 2026-04-12 5/250 2026-04-19 16:54 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭