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可以往一个细胞内转染两次吗 已有1人参与
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| 不知道可 不可以先转进一个基因让细胞过表达，然而再转siRNA干扰另一个蛋白，可不可以，如果可以，是同时转进去还是第一个质粒转进去后多少个小时再转干扰RNA? |
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biostar2009
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-03 19:23:48
nanshi304: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-04 21:04:58
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nanshi304: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-04 21:04:58
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各种纠结。。。 转质粒一般默认48h，转siRNA一般默认72h 这里考虑的更多的并不是质粒DNA和siRNA的稳定性，这两个玩意稳定着呢，一周没问题。 考虑的是最大效率化，lippo转质粒，细胞密度要求90%，转siRNA，细胞密度低一点，所以这么长时间是一盘细胞的生长极限。你再养，细胞死了。 你要两次转染，转染肯定有细胞毒性，耐受性不好的细胞可能转一次就活得不咋地了，这个是你需要提前优化的。 这只是默认，尤其是siRNA。 经常看见有报道，按照默认的72h检测siRNA效果，结果发现定了一堆siRNA，效果都不好，最后发现原来是48h或者24h效果最好，原因不明。 所以如果你的这条siRNA没有做过预实验，先不要搞这么复杂的 转几个小dish，收一个时间梯度，看看什么时候效果最好。 把这些预实验条件先摸好了，再来转两次。 |
4楼2014-04-03 09:25:13
biostar2009
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