应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 可以往一个细胞内转染两次吗
51/1返回列表
查看: 6526  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nanshi304

新虫 (初入文坛)

[求助] 可以往一个细胞内转染两次吗 已有1人参与

不知道可 不可以先转进一个基因让细胞过表达，然而再转siRNA干扰另一个蛋白，可不可以，如果可以，是同时转进去还是第一个质粒转进去后多少个小时再转干扰RNA?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-31 11:13:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

忘了
你说的4-6h
理论上应该是“Lippo-核酸”这个liposome的稳定最长时间
意思就是说，过了这个时间，这个liposome可能就不存在了，可以换液了，尤其是对lippo有毒性的时候，早换液早好。
你可以看见，说明书上说把lippo和DNA/RNA混好之后，说要放20min，然后还加了一句，这玩意可以稳定至少6h。
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-03 09:28:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nanshi304(myprayer代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-31 12:44:42
这个可以的
如果是用Lipofectamine 2000，可以先转siRNA，等24h后再转表达蛋白的质粒
一般siRNA可以72h，蛋白48h足够了，这样时间比较好
而且siRNA转染细胞要求密度不太高，这样长得第二天正好转表达蛋白质质粒
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-03-31 11:58:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nanshi304

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-03-31 11:58:30
这个可以的
如果是用Lipofectamine 2000，可以先转siRNA，等24h后再转表达蛋白的质粒
一般siRNA可以72h，蛋白48h足够了，这样时间比较好
而且siRNA转染细胞要求密度不太高，这样长得第二天正好转表达蛋白质质粒

我还以为6h就可以了，那说明书上说的转染4-6h是说的转染进去还没表达吗？一般质粒转进细胞多久后开始表达啊，还有siRNA要多久发挥干扰效应啊？往一个细胞转染两次会不会对细胞有毒害作用啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-04-02 22:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-03 19:23:48
nanshi304: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-04-04 21:04:58
各种纠结。。。
转质粒一般默认48h，转siRNA一般默认72h
这里考虑的更多的并不是质粒DNA和siRNA的稳定性，这两个玩意稳定着呢，一周没问题。
考虑的是最大效率化，lippo转质粒，细胞密度要求90%，转siRNA，细胞密度低一点，所以这么长时间是一盘细胞的生长极限。你再养，细胞死了。
你要两次转染，转染肯定有细胞毒性，耐受性不好的细胞可能转一次就活得不咋地了，这个是你需要提前优化的。
这只是默认，尤其是siRNA。
经常看见有报道，按照默认的72h检测siRNA效果，结果发现定了一堆siRNA，效果都不好，最后发现原来是48h或者24h效果最好，原因不明。
所以如果你的这条siRNA没有做过预实验，先不要搞这么复杂的
转几个小dish，收一个时间梯度，看看什么时候效果最好。
把这些预实验条件先摸好了，再来转两次。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-04-03 09:25:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-16 11/550 2026-04-17 22:34 by chixmc
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 327求调剂 +26 Xxjc1107. 2026-04-13 29/1450 2026-04-16 10:52 by Espannnnnol
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭