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原代心肌细胞培养已有5人参与
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我目前正在做原代心肌细胞培养，但结果不太理想，死细胞特别多，贴壁细胞很少，并且观察不到搏动。现将整个造作流程写出，请求做原代心肌细胞培养成功的大师们给点建议：培养液为含10%血清（BI）及1%双抗的DMEM高糖，胰酶为碧云天的浓度0.25%含0.02%EDTA。 KM乳鼠75%酒精消毒后取心于预冷的培养液中，清洗血管及纤维组织后转移到另一遇冷的培养液中，将心脏剪碎，每颗心剪成2-3块，吸至15ml离心管，胰酶清洗，上清液弃去，之后加组织块2倍体积的胰酶，37度水浴消化20s，取上清用培养液终止消化，反复操作，直至组织块消化完全。200目滤网3层过滤，1500转，离心5min，制成细胞悬液，种到培养瓶中，90min后分离心肌与成纤维。 请问该过程哪里有问题吗？细胞为什么不活？ |
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