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chancety

金虫 (小有名气)

[交流] 成年SD大鼠脊髓背角神经元原代培养中，如何有效分离得到形态活力好的神经元

虫友们，大家好。最近在做关于成年SD大鼠脊髓背角神经元原代培养。在实验的过程中遇到了些问题，想请教虫友们，请高手不吝赐教，多谢了！
    先简单说一下我的protocol，材料：2 weeks SD大鼠；取材：戊巴比妥钠麻醉，小心解开脊髓腔，取出脊髓彭大部分，放至到冰冻的过滤除菌的ACSF中，剥离软脊膜，将脊髓移入4%FBS+DPBS中，剪刀剪碎。消化过程：先用DPBS洗两遍，用37℃ 0.125%Trypsin/EDTA消化2分钟，10%FBS终止消化。用1ml移液枪轻柔吹打脊髓，吹打过冲中添加0.1mg/ml DNase I。待溶液稍浑浊，静止，接种于24孔板，放至于37℃ CO2 incubator。
    虫友们看一下我的protocol有没有严重理论错误？我的问题是，接种2天后换液，第三天能看到少量活的神经元和胶质细胞，但胞体较脏，胞体不知附着什么类似于组织碎片的东西，达不到试验要求。并且24孔板底部有大量组织碎片贴在孔底部，导致背景较脏。第五天后神经元就死亡了，坚持不了几天。
    如何能使组织碎片较少，如何使细胞胞体干净通透？是从消化过程改进还是吹打方法上改进？请大家积极回帖，高手们不吝赐教。如果有较好的方法学文献更好了，我的金币不多，就100个金币，还请大家详细说说如何改进，谢谢！

[ Last edited by chancety on 2013-11-6 at 20:42 ]
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1楼 2013-11-06 00:26:13
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小苦孩纸

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chancety: 金币+10, 最多给10个 2013-11-15 20:07:39
好巧！我也做这个！有相同疑问！忘以后多多交流！
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9楼2013-11-15 20:06:20
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
…………………………
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2楼2013-11-06 07:05:14
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chancety

金虫 (小有名气)
我去，没人回复呀。。。

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2013-11-08 17:19:52
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浩喜2005

木虫 (著名写手)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
chancety: 金币+10, 谢谢，虽然……但是，哈哈 2013-11-11 00:20:39
祝福顶贴赚金币
楼主不会对我这样敬业的选手只给一两个金币的！
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5楼2013-11-08 17:51:17
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小苦孩纸

金虫 (小有名气)
神作！
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7楼2013-11-15 20:00:32
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chancety

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小苦孩纸 at 2013-11-15 20:00:32
神作！

简单回复没法给金币
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8楼2013-11-15 20:04:04
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windbells636

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
chancety: 金币+10 2014-01-18 16:35:50
成年的做起来活性都不高的，只有乳鼠高
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10楼2013-12-09 16:55:23
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chancety

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by windbells636 at 2013-12-09 16:55:23
成年的做起来活性都不高的，只有乳鼠高

嗯，是的

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2013-12-12 00:41:39
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wyang-0531

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chancety: 金币+10 2014-01-18 16:35:58
这个没做过，我们做乳鼠心肌细胞的培养，消化那一步是最重要的。你认为组织碎片较多，可以试试过筛吧，这个我没做过，具体步骤不太懂，我是从我的培养心肌细胞方面说的，呵呵
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13楼2014-01-18 09:08:53
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sjmr12213楼
2013-11-06 07:12   回复  
qiongjiewei6楼
2013-11-08 18:38   回复  
峰锋风逢烽11楼
2013-12-09 17:32   回复  
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